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Red de Revistas Científicas de América Latina y el Caribe, España y Portugal
Rev. Int. Contam. Ambient. 24 (2) 79-87, 2008
GENOTOXICIDAD Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS TÓXICOS EN UN RESIDUO
LÍQUIDO HOSPITALARIO DE BUENOS AIRES, ARGENTINA
Marta PAZ, Anahí MAGDALENO, Carina TORNELLO, Natalia BALBIS y Juan MORETTON
Cátedra de Higiene y Sanidad. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad de Buenos Aires.
Junín 956,
4º piso, (1113) Ciudad de Buenos Aires, Argentina. Correo electrónico: jamorett@ffyb.uba.ar
(Recibido septiembre 2007, aceptado abril 2008)
Palabras clave: toxicidad, genotoxicidad, efuentes hospitalarios
RESUMEN
Los líquidos residuales no tratados provenientes de centros de salud presentan un riesgo
potencial para la salud y el ambiente debido a que transportan sustancias químicas con
eFectos tóxicos y genotóxicos. La composición de estos líquidos residuales fuctúa
continuamente debido a la gran diversidad de medicamentos, desinfectantes, solventes,
reactivos de laboratorio, detergentes y otros compuestos vertidos a los mismos. En la
Ciudad de Buenos Aires, las aguas residuales procedentes de los centros hospitalarios
no son tratadas
in situ
, sino que se transportan a través del sistema cloacal y se vierten
con un mínimo tratamiento al Río de La Plata, principal fuente de abastecimiento de
agua potable para una población de 10 millones de habitantes. El objetivo de este
trabajo es analizar la presencia de compuestos tóxicos y la genotoxicidad en aguas
residuales del Hospital de Clínicas San Martín de la Universidad de Buenos Aires,
centro médico de alta complejidad que vuelca diariamente 565 m
3
de agua residual
al colector cloacal. Se tomaron muestras de este líquido de lunes a viernes, que se
ensayaron como agua cruda ±ltrada y como extracto obtenido por pasaje a través de
resinas XAD4. La determinación de toxicidad y genotoxicidad del efuente hospitalario
se realizó utilizando distintos sistemas biológicos normatizados: los ensayos de Ames,
Saccharomyces cereviciae
D7
y Rec (+/
-
) con
Bacillus subtilis
. En ninguno de estos
ensayos se evidenció efecto tóxico sobre las cepas empleadas. Los datos obtenidos con
los ensayos de Ames y Rec (+/
-
) no permitieron demostrar actividad mutagénica ni en
las muestras de agua cruda ni en los extractos XAD4. Las determinaciones realizadas
con
Saccharomyces cereviciae
D7
mostraron actividad genotóxica en el agua residual
del día viernes. Se determinó, además, el per±l de tóxicos presentes en las muestras al
seleccionar los más probables, como cadmio, cromo, mercurio y compuestos orgánicos
halogenados; en todos los casos, las concentraciones de estos compuestos en las aguas
residuales fueron inferiores a los límites establecidos para los vertidos industriales a
colectores cloacales. El efecto genotóxico no pudo ser relacionado con la presencia de
estos contaminantes, lo que demuestra la importancia de utilizar ensayos químicos y
biológicos para determinar el posible riesgo ambiental de estos vertidos.
Key words: toxicity, genotoxicity, hospital wastewaters
M. Paz
et al.
80
ABSTRACT
Raw wastewaters from health centers transport a great variety of chemical compounds
like medical drugs, disinfectants, detergent, laboratory reagents, etc. The complex
and fuctuant chemical composition oF these eFfuents opens the possibility oF an
environmental toxicity scenario. Even considering that these wastewaters are diluted
after their discharge towards the municipal sewer system, certain substances present
in the eFfuents can generate by cumulative eFFect a biological imbalance in aquatic
ecosystems. In Buenos Aires city, the urban sewer waters are delivered into the Río
de la Plata with no previous depuration treatment, being the latter the main source of
drinking water for the city. The objective of this work is to analyze the toxicity and
genotoxicity in wastewater samples of San Martin Hospital, an important medical
center that daily releases 565 m
3
of wastewaters to the sewer system. The evaluation
oF the genotoxic potential oF hospital eFfuents was perFormed with diFFerent biological
systems: the Ames test, the
Saccharomyces cereviciae
D7 test and the Rec (+/-) assay
with
Bacillus subtilis
. Samples of raw wastewater and the correspondent XAD4 extract
were submitted to biological test. No mutagenic effect, either with the Ames test or the
Rec (+/-), was detected. Only those samples taken on Friday induced gene conversion
in
Saccharomyces cereviciae
D7. Simultaneously, the chemical toxicity pro±le oF the
samples was studied. Cadmium, chromium, mercury and organic halogenated com-
pounds concentrations were in all cases below the toxicity limits established For eFfuents
release to the sewer system. The results obtained con±rm the existence oF unidenti±ed
hazardous substances in hospital wastewater. The determination of toxicants or toxic
substances concentration in the samples, in addition to a test battery for genotoxicity
detection studies, provide more meaningful information to decision-makers in the
estimation of environmental risk of hospital wastewaters.
INTRODUCCIÓN
Los centros de salud eliminan grandes volúme
-
nes de residuos líquidos contaminados con materia
orgánica a la que se suman antibióticos, antisépticos,
detergentes, solventes, medicamentos, excretas y
secreciones humanas contaminadas por diferentes
tipos de microorganismos patógenos. Estos efuentes
constituyen un riesgo potencial para el ser humano
y el ambiente, lo que se traduce en un impacto para
la salud pública (Ortolan 1999).
La magnitud de dicho impacto ha comenzado a
evaluarse en los últimos años en ámbitos cientí±cos
y gubernamentales (Dremont y Hadjali 1997, Pruess
et al
. 1999, Bassi y Moretton 2003, Paz
et al
. 2004,
Nuñez y Moretton 2006).
En las grandes ciudades los efuentes hospitalarios
líquidos son descargados, sin tratamiento previo, a la
red cloacal municipal que los transporta, junto con
las aguas residuales domésticas, a las plantas para
tratamiento de efuentes.
La composición de los efuentes hospitalarios
líquidos presenta variaciones notables en la compo-
sición cualicuantiativa debido a la gran diversidad
de compuestos químicos y de secreciones humanas
contaminadas que pueden aparecer en su contenido
(Richardson y Bowron 1985, Kümmerer 2001). Re-
conociendo esta situación, la Organización Mundial
de la Salud, a través de la División de Apoyo Ope-
racional en Salud Ambiental y el Centro Europeo de
Salud Ambiental, ha formado un grupo internacional
para estudiar el problema de los residuos en los
centros de salud en países de desarrollo (OPS 1993,
Pruess
et al
. 1999).
Uno de los principales problemas sanitarios rela-
tivos a la contaminación ambiental es el vertido de
residuos tóxicos a las aguas. Por ello es importante
efectuar investigaciones de los riesgos que pueden
producir los contaminantes presentes en las aguas
residuales de centros de salud sobre los ecosiste-
mas (Stumpf
et al
. 1999). Entre los contaminantes
ambientales se encuentran sustancias que poseen
la capacidad de inducir mutaciones y cambios
genéticos en el ecosistema acuático con efectos
genotóxicos (Würgler y Kramers 1992, Ferreira La
Rosa
et al
. 2000, Pitot y Dragan 2001, Emmanuel
et al.
2005).
En la Ciudad de Buenos Aires, las aguas residua-
les procedentes de los centros hospitalarios no son
tratadas
in situ
, sino que se transportan a través del
sistema cloacal. A su vez, las aguas cloacales de la
ciudad no son derivadas a una planta para depura-
GENOTOXICIDAD DE UN RESIDUO LÍQUIDO HOSPITALARIO
81
ción, y se vierten con un mínimo tratamiento al Río
de la Plata, principal fuente de abastecimiento de
agua potable para una población de 10 millones de
habitantes.
El objetivo de este trabajo es determinar la pre-
sencia de los compuestos tóxicos más importantes y
la genotoxicidad de las aguas residuales del Hospital
de Clínicas San Martín de la Universidad de Buenos
Aires, Argentina. Este hospital de alta complejidad
libera aproximadamente 565 metros cúbicos de agua
residual no tratada diariamente al sistema cloacal mu-
nicipal (Paz
et al.
2004). Se ensayó el agua residual
y el extracto empleando tres sistemas biológicos el
ensayo de Ames, el ensayo de levaduras con Sac-
charomyces cerevisiae D7 y el ensayo de Rec (+/
-
)
con
Bacillus subtilis
, y en cada muestra se efectuó
simultáneamente la búsqueda de compuestos orgá
-
nicos halogenados totales y metales pesados como
mercurio, cromo y cadmio.
MATERIALES Y MÉTODOS
El sitio seleccionado para la extracción de mues-
tras de agua residual fue la cámara para inspección del
vertido al sistema cloacal urbano, ubicada en el sector
Azcuénaga del Hospital de Clínicas San Martín.
La estrategia de muestreo para este estudio fue
planteada considerando cuatro tomas de muestra dia-
rias, realizadas durante los cinco días de una misma
semana. Debido a la variabilidad en la composición,
caudal y concentración del agua residual del hospi-
tal durante las distintas horas del día, se utilizaron
muestras compuestas, representativas de los vertidos
realizados durante un período de ocho horas, corres-
pondiente al horario de mayor actividad del hospital.
Se tomaron muestras sucesivas de tres litros cada una,
extraídas con intervalos no superiores a dos horas.
Se mezclaron y se mantuvieron a 4 ºC.
Determinación de metales pesados
Se determinó la concentración de cadmio, cromo
y mercurio en las muestras compuestas correspon-
dientes a cada día de la semana. La determinación
de mercurio se realizó por espectrofotometría de
absorción atómica acoplado a generador de hidruros
en vapor frío (espectrómetro de absorción atómica
marca Varian AA 475, acoplado a generador de
hidruros GVA77). Para la determinación de cadmio
y cromo se utilizó espectrofotometría de absorción
atómica con atomización a llama. En ambos casos se
siguieron las técnicas descritas en American Public
Health Association Standard Methods (1998).
Determinación de compuestos orgánicos haloge-
nados totales
Para la extracción de semivolátiles se aplicó
lo descrito en la norma USEPA 3510 C (1996), la
muestra de 1 litro se acidifcó a pH 2 y se extrajo con
dos porciones de diclorometano (80 mL cada una).
El método de análisis por cromatografía gaseosa fue
el descrito en la norma USEPA 8270 C (1998) y se
utilizó un equipo Hewlett-Packard 5890 Serie II con
detector de espectrometría de masa modelo 5972,
columna HP5-MS, límite de cuantifcación 0.3 mg/L
y límite de detección 0.1 mg/L.
Para determinar los tiempos de retención y res-
puesta de los compuestos buscados se utilizaron como
patrones certifcados cloroFormo, tricloroetileno, clo
-
robenceno, tetracloroeteno y tetracloruro de carbono.
Los compuestos orgánicos volátiles se analizaron por
la técnica de
head space
al colocar 5 mL de muestra
en un vial cerrado herméticamente y calentarlo a 80º
C para fnalmente inyectar en el cromatógraFo 1 mL
del gas en equilibrio con la muestra.
Ensayos de genotoxicidad
La determinación de genotoxicidad del e±uente
hospitalario se llevó a cabo utilizando tres sistemas
biológicos: los ensayos de Ames,
Saccharomyces
cerevisiae
D7 y Rec con
Bacillus subtilis
.
Las muestras de e±uente para estas determina
-
ciones biológicas se procesaron de dos maneras: por
fltración a través de fltros Millipore 0,22 µm, y por
pasaje a través de resinas XAD-4 para concentrar
los compuestos genotóxicos no polares presentes
en las aguas residuales. Las resinas se trataron con
éter etílico para la extracción de dichos compuestos,
el éter fue luego evaporado a presión reducida. El
residuo seco se resuspendió en dimetilsulfóxido,
obteniendo así un extracto concentrado 100 veces
(Dressler 1979, Mortelmans y Zeiger 2000, Siddiqui
y Ahmad 2003).
Ensayo de Ames
Se utilizaron cepas TA98 y TA100 de
Salmonella
typhimurium
, las cuales permitieron determinar la
capacidad de las muestras de e±uente para inducir
sustitución de pares de bases y corrimientos en el
marco de lectura de la molécula de ADN.
Se realizó el ensayo de incorporación en placa
a 2 mL de top-agar fundido y mantenido a 45 ºC
en baño de agua. Se agregó 0.1 mL de un caldo de
cultivo de 10
7
-10
8
células/mL de la cepa bacteriana
correspondiente, 0.1 mL de la muestra en ensayo y
0.5 mL solución reguladora de fosfato ó 0.5 mL de
S9 mix. El contenido de los tubos así preparados se
M. Paz
et al.
82
mezcló y volcó inmediatamente en placas de Petri
que contenían sobre la superfcie 15 ml de medio
mínimo suplementado con glucosa y sales de Vogel-
Bonner. Las determinaciones se realizaron con y sin
la adición de fracción de microsomas (S9), utilizando
la técnica descrita por Mortelmans y Zeiger (2000).
El ensayo indica mutagenicidad cuando el número
de unidades formadoras de colonias (UFC) –en las
placas correspondientes a células tratadas con la
muestra analizada– como mínimo duplica las UFC
en las placas del testigo.
El ensayo con agua residual cruda se realizó a
una concentración de 0.5% V/V de muestra y con la
fracción no polar al 50 % V/V de muestra en dimetil
sulfóxido.
Los resultados de la prueba de Ames fueron inter-
pretados según USEPA 712 C 98-247 (1998).
Ensayo con
Saccharomyces cerevisiae
D7
La cepa D7 de
Saccharomyces cerevisiae
, pro-
veniente de cultivos en caldo en fase logarítmica
tardía de crecimiento, se puso en contacto con agua
residual cruda y con sus correspondientes extractos
durante 2 y 24 horas a 28º C. Para las determinacio-
nes con agua cruda residual 50 % V/V de muestra,
se mantuvieron en contacto con las células durante
2 y 24 horas; en el caso del extracto se ensayaron
diluciones al medio y al décimo, equivalentes al 25
% V/V y 5 % V/V respectivamente del extracto 100
veces concentrado. Transcurrido el periodo de incu-
bación, la mezcla se lava y resuspende en solución
salina para su inoculación en tres medios mínimos:
con isoleucina, triptofano y en medio completo.
Finalizado el periodo de incubación se procedió al
recuento de las UFC, promediándose los valores ob-
tenidos para cada dilución inoculada. A continuación
se calcularon las UFC por mililitro. Las frecuencias
de conversión o reversión surgieron de la relación
UFC/mL de convertantes o revertantes y UFC/mL
totales. Los resultados se consideraron genotóxicos
cuando las frecuencias de conversión o de reversión
génica mitótica superaron en más de dos veces las
frecuencias del testigo.
Este ensayo permite detectar simultáneamente
diversos fenómenos genéticos, tales como conversión
génica mitótica y mutación reversa (Zimmermann
1979, Lah
et al.
2005).
Los resultados obtenidos fueron interpretados
según USEPA 712 C 98-232 (1998).
Ensayo de Rec (+/
-
) con
Bacillus subtilis
Se trabajó con
Bacillus subtilis
PB 1652 (+), cepa
salvaje que conserva intactos sus mecanismos de
reparación del ADN, y
Bacillus subtilis
PB 1791 (
-
),
cepa mutante, defciente en el sistema de reparación
por recombinación de la molécula de ADN. La téc-
nica utilizada permitió determinar daños inducidos
por las muestras a la molécula de ADN, incluyendo
intercalación, ruptura de la molécula de ADN y cam-
bios químicos en las bases nitrogenadas.
Se utilizó la técnica de efciencia de plaqueo, con
concentraciones 0.05, 0.25 y 0.5 % V/V de agua
residual cruda y 5, 25 y 50 % V/V del extracto, de
acuerdo a lo descrito por Mazza (1982).
El criterio para evaluar la genotoxicidad en este
ensayo se basó en lo descrito por Takigami
et al.
(2002). Se grafcó la Frecuencia de sobrevivencia
de las cepas Rec (+) y Rec (
-
) en función de la con-
centración de las muestras y se calculó la diferencia
de áreas bajo las correspondientes curvas. En estas
condiciones pueden considerarse tres rangos de
valores de genotoxicidad:
más de 0.593 altamente
genotóxico (++); entre 0.200 y 0.592 genotóxico (+);
entre – 0.123 y 0.199 no genotóxico (
-
).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En un trabajo anterior (Paz
et al
. 2006) se reali-
zaron determinaciones preliminares en una serie de
muestras obtenidas en distintos sitios de extracción
del Hospital de Clínicas San Martín. Los resultados
que se obtuvieron indicaron la necesidad de estudiar
las oscilaciones de un periodo más acotado y de
correlacionar los datos con la presencia de metales
pesados y compuestos orgánicos halogenados totales
en las muestras de agua residual.
Un grupo de compuestos capaces de alcanzar
concentraciones con efectos tóxicos son los cono-
cidos genéricamente como compuestos orgánicos
halogenados totales. Se originan principalmente
por el contacto de hipoclorito de sodio con materia
orgánica, lo que da como resultado la aparición de
trihalometanos (THM), productos organoclorados
alifáticos y aromáticos, muchos de ellos genotóxi-
cos (Emmanuel
et al.
2004). El Hospital de Clínicas
San Martín emplea mensualmente más de tres mil
litros de solución al 5% de hipoclorito de sodio para
desinFectar grandes superfcies como pisos, paredes,
sanitarios y para lavado de ropa. La mezcla resul-
tante de esta desinfección, arrastrada por grandes
volúmenes de agua corriente, se vierte en Forma más
o menos continua a los e±uentes hospitalarios. Los
ensayos de compuestos clorados totales realizados en
las muestras de e±uentes no mostraron la presencia
de cantidades que puedan considerarse signifcativas
GENOTOXICIDAD DE UN RESIDUO LÍQUIDO HOSPITALARIO
83
desde el punto de vista biológico. Dos son los factores
que pueden infuir para esta situación: por una parte
la gran dilución que suFre el efuente en general y
por otra la escasa formación de THM debido a que
la solución de hipoclorito no toma contacto directo
su±ciente tiempo con la materia orgánica, lo cual ocu
-
rre si la desinfección con este compuesto se realiza
después de lavar las super±cies con detergente.
La OMS considera a los metales pesados como
una categoría especial de contaminantes químicos
con alta toxicidad que pueden aparecer en residuos
hospitalarios. Los residuos de mercurio se generan
principalmente por los derrames de este metal debi-
dos a la rotura de instrumental utilizado en la clínica.
La concentración de este metal debería ser muy baja
debido a que los instrumentos con mercurio han sido
ya reemplazados, en gran parte, por instrumentos
electrónicos. Otra fuente posible de mercurio en agua
está dada por el uso de sales de mercurio y compuestos
orgánicos de mercurio tanto en el laboratorio como
en la desinfección (mercurocromo, bicloruro de mer-
curio); también en estos casos el uso ha disminuido.
El cadmio proviene principalmente del descarte de
baterías y podría aparecer en forma ocasional en las
aguas. Los compuestos de cromo tienen diversos usos
en el laboratorio de análisis clínico y aún se utilizan
para la preparación de mezclas destinadas a la limpieza
de material de vidrio (mezcla sulfocrómica).
En ninguna de las muestras ensayadas se detectó
una concentración a la que pudieran adjudicarse
eFectos biológicamente signi±cativos de los metales
pesados antes mencionados (
Cuadro I
). En contras-
te, los datos que se obtuvieron de las muestras del
efuente hospitalario evidenciaron valores inFeriores
a los hallados en efuentes similares por otros auto
-
res (Ferreira La Rosa
et al
. 2000, Kümmerer 2001).
Los valores bajos eran previsibles debido a que se
estimaba una baja concentración de los compuestos
buscados en el agua residual por razones de uso, a los
que debería sumarse un importante efecto de dilución
por el alto volumen del efuente hospitalario.
Para realizar un correcto estudio de la genotoxici-
dad en muestras ambientales se requiere utilizar como
mínimo dos sistemas biológicos cuyos resultados
puedan considerarse complementarios. En este caso,
con el objeto de aportar datos para un monitoreo
rápido, sencillo y económico aplicable a un efuente
como el generado por hospitales, se seleccionaron
los siguientes ensayos. El ensayo de Ames, el más
difundido, puede considerarse como el ensayo básico
para la determinación de mutagenicidad. Los resul-
tados obtenidos en Ames se complementan con los
del ensayo REC +/
-
, que permite determinar la efec-
tividad en la reparación de las alteraciones inducidas
al genoma, en particular la intercalación y ruptura
de la molécula de ADN y los cambios químicos de
las bases nitrogenadas. Por último, el sistema con la
levadura
Saccharomyces cerevisiae
permite determi-
nar la actividad genotóxica de los agentes químicos
presentes en la muestra sobre una célula eucarionte y
determinar frecuencias de intercambios de segmentos
de ADN entre cromosomas.
Los resultados que se obtuvieron en las muestras
de agua residual hospitalaria en los tres ensayos
para el estudio de genotoxicidad se muestran en
las
Cuadros
II A-B
,
III A-B
y
IV A-B
. Tanto en el
ensayo de Ames como en la prueba con
Saccharomy-
ces cerevisiae
D7 donde se emplean incubaciones
prolongadas, no se detectó actividad tóxica para las
células microbianas. Tampoco se detectaron efectos
genotóxicos en la mayoría de las muestras de acuerdo
a en los ensayos realizados con los tres sistemas. El
único resultado positivo se obtuvo en el muestreo
del día viernes, con el sistema de
Saccharomyces
cerevisiae
D7 que mostró un efecto genotóxico, con
incremento en las frecuencias de conversión génica.
CUADRO I.
METALES PESADOS Y COMPUESTOS ORGÁNICOS HALOGENADOS
EN MUESTRAS DE AGUA RESIDUAL CRUDA DEL HOSPITAL DE
CLINICAS
SAN MARTÍN
Parámetros
Analizados (mg/L)
Lunes
Martes
Miércoles
Jueves
Viernes
Límites**
Cadmio
< 0.5
< 0.5
< 0.5
< 0.5
< 0.5
< 0.5
Cromo
< 0.2
< 0.2
< 0.2
< 0.2
< 0.2
< 0.2
Mercurio
< 0.02
< 0.02
< 0.02
< 0.02
< 0.02
< 0.02
Compuestos orgánicos
halogenados totales
*ND
*ND
*ND
*ND
*ND
< 0.5
* Valores inferiores al límite de detección del equipo
**Admisibles para descargas a la colectora cloacal, Resolución 336/03 AGOSBA
M. Paz
et al.
84
Este efecto pudo evidenciarse tanto en los ensayos
con la muestra de agua cruda como en los realizados
con el extracto, luego de 24 horas de incubación. En
los sistemas de Ames con y sin activación microsomal
y Rec con
Bacillus subtilis
, no se observaron efectos
genotóxicos con dicha muestra.
La conversión génica mitótica es un fenómeno
asociado a daños importantes en el genoma de
Sac-
charomyces
cerevisiae
que llevan a activar los sistemas
para reparación de la molécula de ADN, produciendo
como resultado un intercambio no recíproco de mate-
rial genético entre cromátides no hermanas. Por otra
parte, la inducción de reversión génica mitótica en
esta levadura tiene características similares a la que
ocurre en bacterias (Zimmermann, 1979). Tal como
lo describe Zimmermann (1975), es poco probable
que al ensayar una muestra se observe la inducción
de ambos fenómenos génicos en forma simultánea.
Esto se debe a que los compuestos responsables de la
inducción de conversión génica y de reversión génica
tienen diferentes características. Si se considera el en-
sayo de levaduras en relación con los demás sistemas
biológicos utilizados, puede comprobarse que con
Saccharomyces cerevisiae
D7 se dispone de mayor
tiempo para el contacto entre las células y agua residual
o los extractos. Existe además la posibilidad de ensayar
un volumen mayor de muestra. Esas dos variables
permitirían aumentar la sensibilidad para detectar
genotoxicidad en mezclas complejas como las que
pueden generarse en el agua residual hospitalaria.
La gran diversidad de actividades en el hospital
de Clínicas San Martín, genera un efuente complejo
con una combinación de sustancias cuyo efecto sólo
puede ser determinado mediante el uso de distin-
tos sistemas biológicos. Los efectos biológicos de
mezclas son por lo general imprevisibles, dado que
la actividad genotóxica puede ser atribuida a un
conjunto de propiedades e interacciones químicas
entre varios compuestos (Moretton
et al.
1991, Var-
gas
et al.
1993). El efecto de la mezcla de productos
químicos es con frecuencia diferente de lo previsto
para los componentes ensayados por separado, ya
que pueden observarse sinergismos o antagonismos
entre distintos agentes químicos (Moretton
et al.
1991,
Houk 1992, Vargas
et al.
1993, De Marini 1998, Aus-
ley, 2000). La medición del fujo del agua residual
en la colectora cloacal (sector Azcuénaga) permitió
estimar que el volumen de líquido residual eliminado
a lo largo de las 8 horas del muestreo fue de 270 m
3
.
En estas condiciones debe tenerse en cuenta que exis-
te un considerable efecto de dilución para aquellas
sustancias que no son eliminadas continuamente. Así,
vertidos únicos de concentraciones bajas de agentes
genotóxicos, como los citostáticos, pueden alcanzar
concentraciones no detectables.
Los resultados hallados en este trabajo mostraron
que el riesgo que representa esta fracción de agua
residual para el ecosistema es relativamente bajo en
lo referente a inducción de genotoxicidad, ya que
los valores positivos se detectaron sólo luego de un
contacto prolongado entre las células y el agua resi-
dual y aun así el efecto desapareció con una dilución
fácilmente alcanzable en el sistema cloacal.
Aún con las bajas concentraciones de compuestos
tóxicos detectadas en las muestras pudo demostrarse
un efecto mutagénico, lo que indica la importancia
de utilizar sistemas biológicos en el monitoreo de
este tipo de efuentes.
El trabajo realizado en el Hospital de Clínicas
San Martín pretende ser una referencia para orien-
tar en la elaboración de normas de procedimientos
para la correcta disposición de los vertidos de aguas
residuales.
CUADRO II.
ENSAYO DE AMES
A.
AGUA RESIDUAL CRUDA
M u e s t r a
Cruda
0.5 % V/V
TA98
TA98 (+S9)
TA100
TA100(+S9)
Testigo (
-
)
28 ± 3
20 ± 4
202 ± 18
191 ± 8
Lunes
23 ± 7
18 ± 1
210 ± 12
176 ±12
Martes
22 ± 7
17 ± 5
193 ± 17
187 ±10
Miércoles
18 ± 1
19 ± 3
218 ± 3
172 ± 5
Jueves
16 ± 2
15 ± 4
220 ± 14
185 ± 7
Viernes
17 ± 1
11 ± 4
196 ± 19
178 ± 14
(S9) Fracción de microsomas. Los resultados fueron expresados
como promedio del número de colonias revertantes por placa ±
SD; para 0.1mL de muestras Fltradas. Testigo negativo (
-
) con
amortiguador fosfato
B.
EXTRACTO XAD4 RESUSPENDIDO EN DIMETIL-
SULFOXIDO
Extracto
50 % V/V
TA98
TA98 (+S9)
TA100
TA100(+S9)
Testigo (
-
)
28 ± 3
20 ± 4
202 ± 18
191 ± 8
Testigo (+)
270 ± 12
582 ± 24
Lunes
16 ± 5
26 ± 4
205 ± 14
196 ± 10
Martes
23 ± 7
25 ± 3
258 ± 19
158 ± 7
Miércoles
19 ± 5
18 ± 1
236 ± 16
190 ± 14
Jueves
15 ± 7
16 ± 2
192 ± 27
189 ± 19
Viernes
20 ± 3
17 ± 3
189 ± 16
164 ± 27
(S9) Fracción de microsomas. Los resultados fueron expresados
como promedio del número de colonias revertantes por placa
± SD; para 0.1mL de extractos. Testigo positivo (+) con (S9)
2- amino fuorene 20 µl/placa. Testigo negativo (
-
) con amor-
tiguador fosfato
GENOTOXICIDAD DE UN RESIDUO LÍQUIDO HOSPITALARIO
85
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos a la Dra. Alicia Fabricio de Iorio y
a su equipo de la Facultad de Agronomía UBA por
las determinaciones de metales pesados. Este trabajo
fue parcialmente Fnanciado con un subsidio de la
Secretaría de Ciencia y Técnica de la Universidad
de Buenos Aires. Agradecemos también al Dr. Bru-
ce Ames de la Universidad de Berkeley CA USA,
quien gentilmente cedió las cepas de
Salmonella
typhimurium.
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CUADRO III.
ENSAYO CON
Saccharomyces cerevisiae
D7
A.
AGUA RESIDUAL CRUDA
Muestra cruda
Frecuencia de conversión x 10
4
Frecuencia de reversión x 10
5
Dilución 50% V/V
2 hs
24 hs
2 hs
24 hs
Testigo (-)
1.29 ± 0.05
1.45 ± 0.19
1.04 ± 0.46
1.77 ± 0.19
Lunes
1.20 ± 0.04
2.74 ± 0.77
1.21 ± 0.26
1.57 ± 0.18
Martes
1.24 ± 0.13
1.72 ± 0.35
1.59 ± 0.30
1.75 ± 0.37
Miércoles
1.58 ± 0.07
2.57± 0.90
1.16 ± 0.56
1.64 ± 0.18
Jueves
1.43 ± 0.15
1.58 ± 0.42
1.04 ± 0.22
1.41 ± 0.10
Viernes
1.33 ± 0.16
4.12 ± 0.06
1.45 ± 0.15
1.27 ± 0.50
Viernes
Dilución 10%V/V
1.30 ± 0.05
1.57 ± 0.18
1.12 ± 0.17
1.24 ± 0.09
Frecuencias de conversión y reversión génica mitótica luego de 2 y 24 horas de incubación para las
muestras de agua residual cruda. El resultado marcado en negrita representa genotoxicidad. Testigo
negativo (
-
) con solución Fsiológica
B.
EXTRACTO XAD4 RESUSPENDIDO EN DIMETILSULFÓXIDO
Extracto
Frecuencia de Conversión x 10
4
Frecuencia de Reversión x 10
5
Dilución 25 % V/V
2 hs
24 hs
2 hs
24 hs
Testigo (-)
1.53 ± 0.09
1.75 ± 0.13
1.46 ± 0.16
1.38 ± 0.21
Lunes
2.60 ± 0.12
1.73 ± 0.40
1.10 ±.0.33
1.75 ± 0.10
Martes
2.10 ± 0.10
1.86 ± 0.30
1.30 ± 0.20
1.07 ± 0.12
Miércoles
1.67 ± 0.18
1.47 ± 0.10
1.67 ± 0.18
1.30 ± 0.20
Jueves
2.34 ± 0.15
1.44 ± 0.21
0.97 ± 0.43
1.40 ± 0.25
Viernes
1.80 ± 0.30
4.85 ± 0.28
1.73 ± 0.10
1.83 ± 0.35
Viernes
Dilución
5% V/V
1.00 ± 0.12
1.14 ± 0.30
1.23 ± 0.07
1.30 ± 0.05
Frecuencias de conversión y reversión mitótica luego de 2 y 24 horas de incubación para los extractos
XAD4. El resultado marcado en negrita representa genotoxicidad. Testigo negativo (
-
) con solución
Fsiológica
CUADRO IV.
ENSAYO CON
Bacillus subtilis
REC(+/
-
)
A.
AGUA RESIDUAL CRUDA
Muestra Cruda
Área curva
Rec (+)
Área curva
Rec (-)
Área
Lunes
0.8325
0.7475
0.085
Martes
0.7375
0.7175
0.020
Miércoles
0.8265
0.7965
0.036
Jueves
0.7835
0.7650
0.018
Viernes
0.7495
0.7200
0.029
Testigo positivo (MMS)
0.8715
0.2135
0.658
Testigo positivo (MMS) metil-metan-sulfonato
B.
EXTRACTO XAD4 RESUSPENDIDO EN DIMETIL-
SULFÓXIDO
Extracto
(DMSO)
Área curva
Rec (+)
Área curva
Rec (-)
Área
Lunes
0.8350
0.7225
0.112
Martes
0.7700
0.7055
0.064
Miércoles
0.7860
0.7350
0.051
Jueves
0.7730
0.7590
0.014
Viernes
0.7690
0.7675
0.002
Testigo positivo MMS
0.8715
0.2135
0.658
Testigo positivo (MMS) metil- metan-sulfonato
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