Artículos
Recepción: 02/05/2017
Aprobación: 23/10/2017
Resumen: El estado de conservación de los anfibios ha sido motivo de preocupación debido a la declinación global de sus especies. En Chile la situación es igualmente alarmante debido a que varias especies presentan problemas de conservación. Telmatobius pefauries es una especie de rana endémica considerada críticamente en peligro por la IUCN. Fue descrita para la localidad de Murmuntani, pero actualmente parece estar extinta en su terra typica. En este trabajo investigamos la presión antrópica producto de la agricultura, piscicultura y residuos mineros aledaños sobre una de sus poblaciones. Esta población, recientemente registrada, se encuentra en el río Seco, en la localidad de Copaquilla, Región de Arica y Parinacota, Chile. Se analizó las condiciones fisicoquímicas del agua donde habita esta población, para evaluar una posible contaminación que explique su disminución poblacional detectada. Los resultados indican que todas las variables analizadas se encuentran dentro de la norma chilena, excepto manganeso (0,88mg·l-1 en río Seco, cuando el máximo permitido es 0,2mg·l-1). Concluimos que las aguas analizadas son aptas para la vida acuática y no hay evidencia que indique contaminación por desechos mine- ros. Es necesario evaluar otras variables para establecer con mayor precisión el grado de amenaza de T. pefauri.
Palabras clave: Anfibios, Chile, Conservación, Declinación Poblacional, Telmatobius.
Abstract: The conservation status of amphibians has been a source of deep concern due to the global decline of their species. In Chile the situation is equally alarming, because several species have conservation problems. Telmatobius pefauri is an endemic frog species considered as critically endangered by IUCN. It was described initially for the locality of Murmuntani but currently appears to be extinct in its terra typica. In this study we assessed the anthropic pressure due to agriculture, fish farming and nearby mining waste in a newly registered population of this species. The population is located in the Seco river, which runs through the locality of Copaquilla, Arica and Parinacota region, Chile. The aim of this work was to analyze The physicochemical conditions of the water inhabited by this population were analyzed in order to assess a possible contamination of water that would explain the observed population decline. Results indicate that all variables analyzed are within the Chilean standard, except for manganese (0.88mg·l-1 in Rio Seco, while the maximum permitted is 0.2mg·l-1). We conclude that the analyzed waters are suitable for aquatic life and do not indicate contamination by mining waste. It is necessary to evaluate other variables in order to establish with greater pre- cision the threat level for T. pefauri.
Resumo: O estado de conservação dos anfíbios tem sido motivo de preocupação por causa do declínio global de suas espécies. No Chile a situação é igualmente alarmante devido a que várias espécies apresentam problemas de conservação. Telmatobius pefauries é uma espécie de rã endêmica considerada criticamente em perigo pela IUCN. Foi descrita para a localidade de Murmuntani, mas atualmente parece estar extinta em sua terra típica. Neste trabalho investigamos a pressão antrópica produto da agricultura, piscicultura e resíduos mineiros das proximidades sobre uma de suas populações. Esta população, recentemente registrada, se encontra no rio Seco, na localida de de Copaquilla, Região de Arica e Parinacota, Chile. Analisou-se as condições físico-químicas da água onde habita esta população, para avaliar uma possível contaminação que expli- que a diminuição detectada em sua população. Os resultados indicam que todas as variáveis analisadas se encontram dentro da norma chilena, exceto manganês (0,88mg·l-1 em rio Seco, quando o máximo permitido é 0,2mg·l-1). Concluímos que as águas analisadas são aptas para a vida aquática e não existe evidência que indique contaminação por detritos mineiros. É necessário avaliar outras variáveis para estabelecer com maior precisão o grau de ameaça de T. pefauri.
Introducción
El estado de conservación de los anfibios en el mundo ha sido considerado crítico para muchas especies. Stuart et al. (2004, 2008) han evaluado la declinación de anfibios a nivel global, donde han encontrado que un tercio de las especies del mundo se encuentran amenazadas de extinción, y que al menos el 42% de las especies presentan declinación poblacional, sien- do esta situación más dramática que lo observado en el resto de los vertebrados. Entre las causas probables de esta declinación mundial destacan la destrucción de hábitat por la agricultura y contaminación por plaguicidas (Marco y Quilchano, 2000; van Meter et al., 2015), o por la construcción de infraestructura vial y la consiguiente contaminación por material particulado (Welsh y Ollivier, 1998). El cambio climático podría ser uno de los responsables de la disminución de algunas especies de anfibios, particularmente por el aumento en la radiación ultravioleta (UVB), que genera daño genómico en etapas tempranas de desarrollo ( Bancroft et al., 2008; Blaustein et al., 1994). Igualmente, las enfermedades infecciosas han sido consideradas relevantes en la declinación mundial de anfibios, particularmente la causada por el hongo Batrachochytrium dendrobatidis (Langhammer et al., 2013). Cuando el hongo patógeno invade el cuerpo del animal, compromete el inter- cambio de electrolitos, causando daño cardiaco y muerte (Voyles, 2011). Finalmente, los desechos mineros también provocan declinaciones de poblaciones de anfibios, sobre todo por la presencia de me- tales pesados (Adlassnig et al, 2013) que inciden principalmente en el desarrollo larval (Freda, 1991;Horne y Dunson, 1995; Lefcort et al., 1998; Linder y Grillitsch, 2001).
En relación al estado de conservación de los anfibios en el norte de Chile, es particularmente importante evaluar la situación de las especies del género Telmatobius. Muchas de estas especies son completamente acuáticas; es decir, todo su ciclo de vida lo reali- zan sumergidas en pequeños charcos o lagos (Formas et al., 1999; Veloso, 2006; Barrio-nuevo y Ponssa, 2008; Correa et al., 2011). Especies de este género, tales como T. dankoi, son considerados ‘críticamente en peligro’ por habitar en cursos de agua asociadas a actividades antropogénicas (Lobos et al., 2016). En Argentina se han identificado especies de Telmatobius infectadas de Chytridiomycosis (Barrionuevo y Mangione, 2006). Telmatobius pefauri (Veloso y Trueb, 1976) fue descrita originalmente en la localidad de Murmuntani (18º 21’S, 69º327’O, 3200msnm) con un ejemplar colectado el 23/11/1972. Según Veloso y Trueb (1976) esta especie es absolutamente acuática, habita lechos angostos, con escasa vegetación acuática y pozas poco profundas. Díaz-Páez y Ortiz (2003) la señalan como una especie con baja abundancia local y que está bajo al menos una unidad de protección (Sistema Nacional Áreas Silvestres Protegidas del Estado). Ha sido frecuentemente determinada como ‘rara’ (Glade, 1988; Formas, 1995; Núñez et al., 1997; SAG, 1998; Díaz-Páez y Ortiz, 2003). Sin embargo, la IUCN (2015) la ha clasificado como ‘en peligro crítico’. Actualmente esta especie es considerada sinónimo de T. zapahuirensis y además de ser conocida para Muruntani y Zapahuira, es conocida para Copaquilla, Belén, Lupica, Saxamar y Socoroma, localidades todas ubicadas entre los 2930 msnm y 3600msnm en la Provincia de Parinacota (Fibla et al., 2017).
La localidad de Copaquilla es atravezada por el río Seco (Figura 1), que corresponde al hábitat de una población de T. pefaurique y presenta una serie de intervenciones antrópicas, principalmente debido a la agricultura y piscicultura que se desarrolla en la zona, ade- más de acopios mineros cerca- nos. En 1980 la empresa Procesadora de Metales Li- mitada (PROMEL) fue autori- zada a explotar un yacimiento aurífero denominado Mina Vilacollo, en el cerro Choquel impie, comuna de Putre. El material era extraído de dicha zona y trasladado a la Planta Pukará, la que se ubicaba en Altos de Copaquilla, donde se trataban minerales auro-argen- tíferos por cianuración. Esta planta funcionó hasta el año 1989, siendo desmantelada y dejándose en el sector cerca de 2´106ton de desecho minero, envases de productos tóxicos y residuos minerales. Desde el lugar donde se ha encontrado la población de T. pefauri, has- ta donde se emplazan los res- tos mineros hay 1,4km de dis- tancia, con vientos permanen- temente dirigidos a dicha zona y en pendiente pronunciada de 45º. Esta situación ha generado profundas controversias por posibles daños ambientales en perjuicio de los agricultores de Copaquilla.
Producto de esta situación ambiental, planteamos como objetivo evaluar las caracterís- ticas f isicoquímicas del río Seco, y determinar la presencia y concentraciones de metales pesados que puedan afectar la sobrevivencia de la población de este anfibio, ya que se ha podido establecer que dicha población ha disminuido desde el 2013 al presente (Tabla I).
Material y Métodos
El estudio se realizó en el río Seco, que atravieza la localidad de Copaquilla (18º25’13, 25’’S; 69º34’05,17’’O; 2980msnm). Se establecieron tres estaciones de monitoreo (S1, S2 y S3), donde en la primera de ellas se en- contró una población de T. pe- faurien el 2013. Las estaciones 2 y 3 fueron evaluadas desde el 2014 al 2016. El río Seco es un curso de agua irregular, que se une a una vertiente que nace de aguas subterráneas, y presenta un caudal inestable. Esta última vertiente corres- ponde a los sitios S2 y S3 de monitoreo. A partir de los mo- nitoreos del 2014 y hasta el 2015 se evaluó el río Zapahuira con un transepto de 1000m de longitud, para hallar poblacio- nes de T. pefauri, pero no se tomaron muestras de agua de este caudal, por no encontrarse ejemplares de esta especie, y porque el río se secó en el año 2015, impidiendo la subsistencia de anfibios de este género. En cada transepto se tomaron muestras de agua en las fechas indicadas para los conteos de las poblaciones de anfibios.
Este estudio se llevó a cabo a partir de febrero del 2013 hasta junio del 2016. En cada estación de muestreo se estableció un transepto de longitud fija, donde los anfibios adultos y larvas fueron colectados durante el día manualmente o con mallas entomológicas. A cada ejemplar se le tomaron medidas estándar (Cei, 1962, 1980; Veloso et al., 1982; Formas et al., 1999), para luego ser liberados en su ambiente natural. En la colecta y manipulación de los ejemplares se siguió el protocolo propuesto por Lobos et al. (2011). Las medidas de los ejemplares colectados (Tabla II) fueron comparados con las previamente publicadas por Veloso y Trueb (1976) para Murmuntani y Veloso et al. (1982) para el Río Zapahuira.
En cada transepto se midieron parámetros fisicoquímicos del agua. Para ello se tomaron muestras de agua de acuerdo al protocolo indicado por Severiche et al. (2013). La temperatura del aguafue tomada al mediodía (12:00) en todas las estaciones. Las demás mediciones fueron llevadas a cabo en el Laboratorio de Investigaciones Medioambientales de Zonas Áridas (LIMZA) de la Universidad de Tarapacá. Fueron determinados: pH (método potenciométrico; ME-29 en SISS, 2007), conductividad (método conductimétrico; 2520- B en Sandard Methods, 2005), sólidos disueltos totales (método gravimétrico; ME-31 en SISS, 2007), turbidiedad (método nefelométrico; ME-03 en SISS, 2007) y los siguientes metales pesados: arsénico (método espectrofotométrico por absorción atómica con generación de hidruro (Morand et al., 2002; ME-12 en SISS, 2007); plomo, cadmio, cobre, manganeso y zinc (método espectrofotométrico por absorción atómica con aspiración directa; Skoog y West, 1986 y, respecticavamente, los siguientes métodos del Manual SISS (2007): ME-18, 13, 04, 08, y 11). Las medidas obtenidas fueron comparadas con la Norma Chilena Oficial de 1979, modificada en 1987 (NCh 1333, 1987), donde se establecen los requisitos de calidad de agua para diferentes usos, incluyendo consumo humano, bebida de animales, riego, recreación (con y sin contacto directo), estética y vida acuática. También se describe el hábitat de la especie, considerando la vegetación asociada a los cursos de agua, otras especies con que coexiste y posibles depredadores.
Figura 1
Mapa de distribución de Telmatobius pefauri en la localidad de Copaquilla. A: Chile y Región de Arica y Parinacota. B: Cuadrante que indica el rango de distribución de T. pefauri. C: Flecha indica ubicación de estaciones de monitoreo, cuadrado indica ubicación de acopio de minerales abandonados.
ESTACIONES DE MONITOREO DE Telmatobius pefauri EN LA LOCALIDAD DE COPAQUILLA, CHILE, ENTRE 2013 Y 2016, PARA LARVAS Y ADULTOS
Resultados
Los resultados obtenidos del análisis fisicoquímico de las muestras de agua tomadas del río Seco (Tabla III) indican que las concentraciones de todos los elementos químicos analizados se encuentran dentro de los límites máximos permitidos, excepto el manganeso, elemento que se encontró en una concentración promedio de 1,2mg·l-1, muy superior a la norma chile- na 1333 (NCh 1333, 1987), que indica un límite de 0,2mg·l-1. El valor máximo, de 2,2mg·l-1, fue encontrado en S3, lugar donde se encuentró la mayor proporción de larvas observadas hasta junio del 2016.
MEDIDAS CORPORALES DE Telmatobius pefauri DE LA LOCALIDAD DE COPAQUILLA, COMPARADOS CON ESPECÍMENES TIPO DE LA LOCALIDAD DE ZAPAHUIRA Y MURMUNTANI
El arsénico mostró concentraciones muy por debajo del límite establecido por la norma chilena 1333 (0,1mg·l-1), y nuevamente la estación S3 tuvo el mayor valor (0,06mg·l-1). Plomo y cadmio, dos metales pesados de alta incidencia en salud humana, presentaron valores muy bajos en relación a la norma nacional, al igual que cobre y zinc. Los sólidos disueltos totales (SDT) también estuvieron bajo la norma nacional, con 341,6mg·l-1, cuando lo establecido es <500mg·l-1 La turbiedad tuvo un promedio de 1,7 UNT, donde la norma establece <30 UNT.
VARIABLES FISICOQUÍMICAS REGISTRADAS EN TRES ESTACIONES CON PRESENCIA DE EJEMPLARES DE Telmatobius pefauri DE LA LOCAL
En cuanto a las variables físicas, la temperatura fue en promedio de 18,7ºC, tomada siempre al mediodía, cuando las larvas se observan más activas. El pH estuvo entre 6,6 y 7, y la conductividad fue de 461,6μS·cm-1 en promedio (<700μS·cm-1 en la norma chilena).
Desde el 2013 se ha evaluado el número de ejemplares adultos y larvas en el río Seco, observándose una disminución progresiva de la población. Las evaluaciones se han registrado en tres transeptos diferentes. El primer hallazgo de esta población fue realizada el 05/02/ 2013 en el transepto denominado S1, donde había una numerosa población de adultos y larvas. Posterior a ello se hizo un seguimiento a estas poblaciones, registrándose su desaparición en marzo del 2016 porque el curso de agua estaba completamente seco. Siguiendo el curso ‘río abajo’ se encontraron ejemplares en dos tramos, denominados S2 y S3, pero en muy bajo número de adultos y larvas (Tabla I). En la exploración realizada el 22/06/2016 se encontraron muertos dos ejemplares adultos de T. pefauri y uno de Rhinella spinolosus en el tramo S3, sin presentar evidencias de haber sido depredadas.
La vegetación asociada a los cursos de agua corresponde principalmente a ‘cola de zorro’ (Cortaderia atacamensis) especie que se encuentra donde hay pequeños charcos derivados de la corriente principal, lugar que genera una mayor protección a ejemplares adultos. Al contrario, las larvas se encuentran mayormente al centro del curso de agua donde hay bajo caudal y se forman posas entre 30 y 150cm de profundidad, con alta concentración de algas del género Nostoc. Esporádicamente se observan garzas (Egretta thula) como los únicos depredadores posibles para la especie.
Discusión
Desde el año 2013 hasta el presente se ha examinado el río Zapahuira en reiteradas oportunidades sin encontrarse especie alguna de anfibios. De acuerdo a observaciones de este equipo de trabajo, el río estuvo completamente seco desde abril a julio del 2015, impidiendo la sobrevivencia de cualquier especie del género Telmatobius en la zona, por lo que podemos plantear que exis- te una alta probabilidad de que dicha poblaciónse encuentre extinta en esa localidad. Al parecer, los últimos ejemplares colectados en esta zona corres- ponden a los analizados gené- ticamente por Sáez et al. (2014). Junto con ellos se pue- de observar que ejemplares de la localidad de Belén (18º29’23,13’’S; 69º31’37,77’’O) son genéticamente muy simila- res a los de Zapahuira, pudién- dose considerar la misma espe- cie, poblaciones que están separadas por ~20km. A su vez, Belén y Copaquilla están separados por ~16km en línea recta y, debido a su cercanía, ambas poblaciones corresponden también a la misma especie (Fibla et al., 2017). En ese sentido, el polígono conformado entre Zapahuira, Copaquilla y Belén debe ser considerado el rango de distribución de esta especie, con un área de ~150km2.
En relación a su preservación, esta especie no se encuentra en ningún área silvestre protegida de la región, por lo que su protección es nula. Más aún, tanto Copaquilla como Belén son áreas de explotación agrícola, por lo que están bajo fuerte presión antrópica tanto por el uso del agua, como por la aplicación de plaguicidas, compuestos alta- mente tóxicos que pueden afectar directa o indirectamente a las poblaciones de anfibios, ya sea adultos o larvas ( Van Meter et al., 2015).
La población encontrada en Copaquilla se encuentra además amenazada por acopios de origen minero, como los que se encuentran en Altos de Copaquilla, que fueron abandonados por la empresa explotadora. Sin embargo, en este estudio se pudo constatar que en la actualidad estos residuos no estarían contaminando el río Seco. A pesar de eso, la minería es una amenaza permanente para las poblaciones de anfibios, producto de ser causante de la disminución de los cursos de agua y pérdidas de hábitat, así como de contaminación con residuos tóxicos (Lobos et al., 2016).
En general, los resultados de los análisis de agua efectuados se encuentran dentro de los valores permitidos por la Norma Chilena 1333, y demuestran que las aguas son libres de contaminantes químicos. Ello indicaría que el agua del río Seco es apta para la vida acuática. Entre las estudiadas, la única variable evaluada que escapa a esta norma es el manganeso, cuya magnitud la sobrepasó en al menos 10 veces. Altas concentraciones de Mn pueden tener incidencia en diversas patologías o cambios fisiológicos que pueden alterar la adecuación biológica de los anfibios. En el caso de las patologías, hay evidencias clínicas y experimentales en que la actividad colinérgica juega un rol clave en la fisio- patología de la neurotoxicidad inducida por este elemento químico (Finkelstein et al., 2007). El Mn actúa como un factor de estrés químico en las neuronas colinérgicas de una manera que causa una degradación específica de los mecanismos homeostáticos celulares, influyen- do por ejemplo en el desencadenamiento del Parkinson (Finkelstein et al., 2007). Por otro lado, se han identificado una serie de patologías neuro- degenerativas asociadas a este metal, denominadas ‘manganismos’, con efectos en estados tempranos del desarrollo (Okada et al., 2016). Michalke y Fernsebner (2014) presentan una revisión extensa sobre las distintas patologías asociadas a Mn en humanos, pero no hay antecedentes de cómo pudiese afectar el desarrollo larval en anfibios.
Aún quedan variables por evaluar para tener una mayor certeza del estado de conserva- ción de esta especie de anfibio. Debido a la evidente disminución de esta población, la que es una de las tres o cuatro que aún quedan de esta especie, es importante seguir investigando cuál es el origen de su disminución poblacional; por ejemplo, incluir en el análisis fisicoquímico del agua la presencia de plaguicidas que eventualmente sean usados para la agricultura de la zona, y también medir las radiaciones UVB que podrían afectar el desarrollo larval. Es importante que T. pefauri pase a ser parte del listado de especies amenazadas en la región, y que se desarrollen programas de conservación institucionales coordinados por la Estrategia Regional de Biodiversidad de la Región de Arica y Parinacota, Chile, para evitar su extinción.
Agradecimientos
Loa autores agradecen a Juliana Marca, miembro de la comunidad aymara de Copaquilla, por permitirnos ingresar a sus predios para evaluar la población de anfibios y por su voluntad de colaborar en la conservación de esta especie, y al Servicio Agrícola y Ganadero por el permiso 5674/2013. Este trabajo fue financiado en parte por UTA Mayor de Investigación 4710/15 de la Universidad de Tarapacá.
REFERENCIAS
Adlassnig W, Sassman S, Grawunder A, Puschenreiter M, Horvath A, Koller-Peroutka M (2013) Amphi- bians in metal-contaminated há- bitats. Salamandra 49: 149-158.
Bancroft BA, Baker NJ, Blaustein AR (2008) A meta-analysis of the effects of ultraviolet B radiation and its synergistic interactions with pH, contaminants, and disease on Amphibian survi- val. Conserv. Biol. 22: 987-996.
Barrionuevo S, Mangione S (2006) Chytridiomycosis in two species of Telmatobius (Anura: Lepto- dactylidae) from Argentina. Dis. Aquat. Organ. 73: 171-174.
Barrionuevo S, Ponssa ML (2008) Decline of three species of the genus Telmatobius (Anura: Leptodactylidae) from Tucuman province, Argentina. Herpeto- logica 64: 47-62.
Blaustein RB, Hoffman PD, Hokit DG, Kiesecker JM, Walls SC, Hays JB (1994) UV repair and resistance to solar UV-B in am- phibian eggs: A link to popula- tion decline? Proc. Nat. Acad. Sci. 91: 1791-1795.
Cei JM (1962) Batracios de Chile. Universidad de Chile. Santiago, Chile. 128 pp.
Cei JM (1980) Amphibians of Argen- tina. Monitore zoologico italiano N.S. Monografía 2. Italia.
Correa C, Cisternas J, Correa M (2011) Lista comentada de las especies de anfibios de Chile (Amphibia: Anura). Bol. Bio- divers. Chil. 6: 1-21.
Díaz-Páez H, Ortiz JC (2003) Evaluación del estado de conservación de los anfibios en Chile. Rev. Chil. Hist. Nat. 76: 509-525.
Fibla P, Sáez PA, Salinas H, Araya C, Salaberry M, Méndez M (2017) The taxonomic status of two Telmatobius frog species (Anura: Telmatobiidae) from the western Andean slopes of northernmost Chile. Zootaxa 4250: 301-314.
Finkelstein Y, Milatovic D, Aschner M (2007) Modulation of choli- nergic systems by manganese. Neurotoxicology 28: 1003-1014.
Formas R (1995) Anfibios. En Simonetti JA, Arroyo MTK, Spotorno AE, Lozada E ( Eds.) Diversidad Biológica de Chile. Comisión Nacional de Investigación Científica y Tecnológica. Artegrama. Santiago, Chile. pp 314-325.
Formas R, Northland I, Capetillo J, Núñez JJ, Cuevas CC, Brieva LM (1999) Telmatobius dankoi, una nueva especie de rana acuática del norte de Chile (Leptodactilidae). Rev. Chil. Hist. Nat. 72: 427-445.
Freda J (1991) The effects of aluminum and other metals on amphibians. Environ. Pollut. 71: 305-328.
Glade AA (ed.) (1988) Libro Rojo de los Vertebrados Terrestres de Chile. Corporación Nacional Forestal, Santiago, Chile. 65 pp.
Horne MT, Dunson WA (1995) Effects of low pH, metals, and water hardness on larval amphibians. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 29: 500-505.
IUCN SSC Amphibian Specialist Group (2015) Telmatobius pefauri. The IUCN Red List of Threatened Species 2015: e.T21583A79809777. http://d x . d oi . o r g/ 10 . 2305 /I UC N. UK.2015- 4.RLTS.T21583A798 09777.en (Cons. 23/05/2017).
Langhammer PF, Lips KR, Burrowes PA, Tunstall T, Palmer CM, Collins JP (2013) A fungal pathogen of amphibians, Batrachochytrium dendrobatidis, attenuates in pathogenicity with in vitro passages. PLoS ONE 8(10): e77630.
Lefcort H, Meguire RA, Wilson LH, Ettinger WF (1998) Heavy metals alter the survival, growth, metamorphosis, and antipredatory behavior of Columbia spotted frog (Rana luteiventris) tad- poles. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 35: 447-456.
Linder G, Grillitsch B (2001) Ecotoxicology of metals. En Sparling DW, Linder G, Bishop CA ( Eds.) Ecotoxicology of Amphibians and Reptiles. SETAC. Pensacola, FL, USA. pp. 325-408.
Lobos G, Vidal M, Labra A, Correa C, Rabanal F, Díaz-Páez H, Alzamora A, Soto C (2011) Protocolo para el control de enfermedades infecciosas en anfibios durante estudios de campo. Red Chilena de Herpetología. http://media.wix.com/ ugd/a92899_c4bf8034a 3ec9e- 8f73b3af30b015995d.pdf (Cons. 23/05/2017).
Lobos G, Rebolledo N, Charrier A, Rojas O (2016) Natural history notes of Telmatobius dankoi (Anura, Telmatobiidae), a critically endangered species from northern Chile. Stud. Neotrop. Fauna Environ. 51: 152-157.
Marco A, Quilchano C (2000) Impacto sobre los anfibios de la contaminación por fertilizantes químicos.Quercus 172: 14-19.
Michalke B, Fernsebner K (2014) New insights into manganese toxicity and speciation. J. Trace Elem. Med. Biol. 28: 106-116.
Morand EE, Giménez MC, Benítez ME, Garro OA (2002) Determinación de Arsénico en Agua por Espectrometría de Absorción Atómica con Generación de Hidruro (HG-AAS). Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas. Universidad Nacional del Nordeste, Argentina.
NCh 1333 (1987) Norma Chilena Oficial. Requisitos de Calidad del Agua para Diferentes Usos. Instituto Nacional de Normalización. Santiago, Chile. http://ciperchile. cl / pd fs/ 11-2013 / norov i r u s/ NCh1333-1978_Mod-1987.pdf
Núñez H, Maldonado V, Pérez R (1997) Reunión de trabajo con especialistas de herpetología para categorización de especies según estados de conservación. Bol. Mus. Hist. Nat. Chile 329: 12-19.
Okada MA, Neto FF, Nosso CH, Voigt CL, Campos SX, Alberto de Oliveira Ribeiro C (2016) Brain effects of manganese exposure in mice pups during pre- natal and breastfeeding periods. Neurochem. Int. 97: 109-116.
Sáez P, Fibla P, Correa C, Sallaberry M, Salinas H, Veloso A, Mella J, Iturra P, Méndez M (2014) A new endemic lineage of the Andean genus Telmatobius (Anura, Telmatobiidae) from the western slopes of the central Andes. Zool. J. Linn. Soc. 171: 769-782.
SAG (2015) La Ley de Caza y su Reglamento. Legislación sobre Fauna Silvestre. Servicio Agrícola y Ganadero. Ministerio de Agricultura. Chile.
Severiche C, Castillo M, Acevedo R (2013) Manual de Métodos Analíticos para la Determinación de Parámetros Fisicoquímicos Básicos en Aguas. Fundación Universitaria Andaluza Inca Gar- cilaso. Málaga, España. 101 pp.
SISS (2007) Manual de Métodos de Ensayo para Agua Potable. Métodos de Análisis, 2 ª ed. Superintendencia de Servicios Sanitarios. Gobierno de Chile. 268 pp.
Skoog DA, West DM (1986) Introducción a la Química Analítica. Reverté. Barcelona, España. 591 pp.
Standard Methods (2005) Electrical conductivity method. En Standard Methods for Examination of Water & Wastewater. 21a ed. APHA-AWWA-WEF. 541 pp.
Stuart SN, Chanson JN, Cox NA, Young BE, Rodrigues SA, Fischman DL, Waller RW (2004) Status and trends of am- phibian declines and extintions worlwide. Sciencexpress Report October, 1-5.
Stuart SN, Hoffman M, Chanson J, Cox N, Berridge R, Ramani P, Young B (Eds.) (2008) Threa- tened Amphibians of the World. Lynx. Barcelona, España; Gand, Suiza; Conservation Interna- tional, Arlington, Virginia, USA.
Van Meter RJ, Glinski DN, Henderson WN, Garrison AW, Cyterski M, Purucker ST (2015) Pesticide uptake across the amphibian dermis through soil and overspray exposures. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 69: 545-556.
Veloso A (2006) Batracios de las cuencas hidrográficas de Chile: origen, diversidad y estado de conservación. En Vila I, Veloso A, Schlatter R, Ramírez C (Eds.) Macrófitas y Vertebrados de Los Sistemas Límnicos de Chile. Universitaria. Santiago, Chile. pp. 103-140.
Veloso A, Trueb L (1976) Descriptions of a new species of Telmatobiine frog, Telmatobius (Amphibia, Leptodactylidae) from the Andes of northern Chile. Occas. Papers Mus. Nat. Hist. Lawrence, Kansas 62: 1-10.
Veloso A, Sallaberry M, Navarro J, Iturra P, Valencia J, Penna M, Díaz N (1982) Contribución sistemática al conocimiento de la Herpetofauna del extremo norte de Chile. En Veloso A, Bustos E (Eds.) El Hombre y los Ecosistemas de Montaña. Vol. 1. MAB 6. Santiago, Chile. pp. 135-268.
Voyles J (2011) Phenotypic profiling of Batrachochytrium dendrobatidis, a lethal fungal pathogen of amphibians. Fungal Ecol. 4: 196-200.
Welsh HH, Ollivier LM (1998) Stream amphibians as indicators of ecosystem stress: a case stu- dy from California’s redwoods. Ecol. Applic. 8: 1118-1132.
