﻿<?xml version="1.0" encoding="utf-8"?>
<!DOCTYPE article
  PUBLIC "-//NLM//DTD JATS (Z39.96) Journal Publishing DTD v1.0 20120330//EN" "http://jats.nlm.nih.gov/publishing/1.0/JATS-journalpublishing1.dtd">
<article article-type="research-article" dtd-version="1.0" specific-use="sps-1.8" xml:lang="es" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink">
	<front>
		<journal-meta>
			<journal-id journal-id-type="publisher-id">rica</journal-id>
			<journal-title-group>
				<journal-title>Revista internacional de contaminación ambiental</journal-title>
				<abbrev-journal-title abbrev-type="publisher">Rev. Int. Contam.
					Ambient</abbrev-journal-title>
			</journal-title-group>
			<issn pub-type="ppub">0188-4999</issn>
			<publisher>
				<publisher-name>Universidad Nacional Autónoma de México, Centro de Ciencias de la Atmósfera</publisher-name>
			</publisher>
		</journal-meta>
		<article-meta>
			<article-id pub-id-type="doi">10.20937/RICA.53711</article-id>
			<article-id pub-id-type="publisher-id">00013</article-id>
			<article-categories>
				<subj-group subj-group-type="heading">
					<subject>Artículos</subject>
				</subj-group>
			</article-categories>
			<title-group>
				<article-title>PATOTIPOS Y RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS DE <italic><italic>Escherichia
							coli</italic> EN AGUA RESIDUAL</italic></article-title>
				<trans-title-group xml:lang="en">
					<trans-title>PATHOTYPES AND ANTIBIOTIC RESISTANCE OF <italic><italic>Escherichia
								coli</italic> IN RESIDUAL WATER</italic></trans-title>
				</trans-title-group>
			</title-group>
			<contrib-group>
				<contrib contrib-type="author">
					<name>
						<surname>Martínez-Orgániz</surname>
						<given-names>Ángeles</given-names>
					</name>
					<xref ref-type="aff" rid="aff1"><sup>1</sup></xref>
				</contrib>
				<contrib contrib-type="author">
					<name>
						<surname>Garza-Ramos</surname>
						<given-names>Ulises</given-names>
					</name>
					<xref ref-type="aff" rid="aff2"><sup>2</sup></xref>
				</contrib>
				<contrib contrib-type="author">
					<name>
						<surname>Sampedro-Rosas</surname>
						<given-names>María L.</given-names>
					</name>
					<xref ref-type="aff" rid="aff1"><sup>1</sup></xref>
				</contrib>
				<contrib contrib-type="author">
					<name>
						<surname>González-González</surname>
						<given-names>Justiniano</given-names>
					</name>
					<xref ref-type="aff" rid="aff1"><sup>1</sup></xref>
				</contrib>
				<contrib contrib-type="author">
					<name>
						<surname>Nava-Faustino</surname>
						<given-names>Getzemany</given-names>
					</name>
					<xref ref-type="aff" rid="aff3"><sup>3</sup></xref>
				</contrib>
				<contrib contrib-type="author">
					<name>
						<surname>Toribio-Jiménez</surname>
						<given-names>Jeiry</given-names>
					</name>
					<xref ref-type="aff" rid="aff3b"><sup>3</sup></xref>
					<xref ref-type="corresp" rid="c1">*</xref>
				</contrib>
			</contrib-group>
			<aff id="aff1">
				<label>1 </label>
				<institution content-type="original">Centro de Ciencias de Desarrollo Regional,
					Universidad Autónoma de Guerrero, Pino s/n, Col. El Roble, 39640 Acapulco,
					Guerrero, México.</institution>
				<institution content-type="normalized">Universidad Autónoma de
					Guerrero</institution>
				<institution content-type="orgdiv1">Centro de Ciencias de Desarrollo
					Regional</institution>
				<institution content-type="orgname">Universidad Autónoma de Guerrero</institution>
				<addr-line>
					<named-content content-type="city">Acapulco</named-content>
          <named-content content-type="state">Guerrero</named-content>
				</addr-line>
				<country country="MX">Mexico</country>
			</aff>
			<aff id="aff2">
				<label>2 </label>
				<institution content-type="original">Instituto Nacional de Salud Pública, Av.
					Universidad 655, Col. Santa María Ahuacatitlán, 62100 Cuernavaca, Morelos,
					México.</institution>
				<institution content-type="normalized">Instituto Nacional de Salud
					Pública</institution>
				<institution content-type="orgname">Instituto Nacional de Salud
					Pública</institution>
				<addr-line>
					<named-content content-type="city">Cuernavaca</named-content>
          <named-content content-type="state">Morelos</named-content>
				</addr-line>
				<country country="MX">Mexico</country>
			</aff>
			<aff id="aff3">
				<label>3 </label>
				<institution content-type="original">Laboratorio de Microbiología Molecular y
					Biotecnología Ambiental, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Autónoma de
					Guerrero, Col. Haciendita, 39087 Chilpancingo, Guerrero, México.</institution>
				<institution content-type="normalized">Universidad Autónoma de
					Guerrero</institution>
				<institution content-type="orgdiv2">Laboratorio de Microbiología Molecular y
					Biotecnología Ambiental</institution>
				<institution content-type="orgdiv1">Facultad de Ciencias Químicas</institution>
				<institution content-type="orgname">Universidad Autónoma de Guerrero</institution>
				<addr-line>
					<named-content content-type="city">Chilpancingo</named-content>
          <named-content content-type="state">Guerrero</named-content>
				</addr-line>
				<country country="MX">Mexico</country>
			</aff>
			<aff id="aff3b">
				<label>3 </label>
				<institution content-type="original">Laboratorio de Microbiología Molecular y
					Biotecnología Ambiental, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Autónoma de
					Guerrero, Col. Haciendita, 39087 Chilpancingo, Guerrero, México.</institution>
				<institution content-type="normalized">Universidad Autónoma de
					Guerrero</institution>
				<institution content-type="orgdiv2">Laboratorio de Microbiología Molecular y
					Biotecnología Ambiental</institution>
				<institution content-type="orgdiv1">Facultad de Ciencias Químicas</institution>
				<institution content-type="orgname">Universidad Autónoma de Guerrero</institution>
				<addr-line>
					<named-content content-type="city">Chilpancingo</named-content>
          <named-content content-type="state">Guerrero</named-content>
				</addr-line>
				<country country="MX">Mexico</country>
				<email>jeiryjimenez2014@gmail.com</email>
			</aff>
			<author-notes>
				<corresp id="c1">
					<label>*</label> Autora para correspondencia:
						<email>jeiryjimenez2014@gmail.com</email>
				</corresp>
			</author-notes>
			<!--<pub-date date-type="pub" publication-format="electronic">
				<day>13</day>
				<month>09</month>
				<year>2021</year>
			</pub-date>
			<pub-date date-type="collection" publication-format="electronic">-->
				<pub-date pub-type="epub-ppub">
				<month>11</month>
				<year>2020</year>
			</pub-date>
			<volume>36</volume>
			<issue>4</issue>
			<fpage>957</fpage>
			<lpage>966</lpage>
			<history>
				<date date-type="received">
					<day>01</day>
					<month>09</month>
					<year>2019</year>
				</date>
				<date date-type="accepted">
					<day>01</day>
					<month>04</month>
					<year>2020</year>
				</date>
			</history>
			<permissions>
				<license license-type="open-access"
					xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/" xml:lang="es">
					<license-p>Este es un artículo publicado en acceso abierto bajo una licencia
						Creative Commons</license-p>
				</license>
			</permissions>
			<abstract>
				<title>RESUMEN</title>
				<p>La contaminación del agua es un problema ambiental grave. En una planta de
					tratamiento de agua residual (PTAR) en México se evaluó la presencia de
					coliformes fecales totales y de <italic>Escherichia coli</italic>, la
					prevalencia de patotipos diarreicos y los perfiles de resistencia a los
					antibióticos en las diferentes etapas del tratamiento. Se realizaron tres
					muestreos compuestos para evaluar la presencia de <italic>E. coli</italic> con
					los parámetros físicos y químicos establecidos en la Norma Oficial Mexicana
					NOM-001-SEMARNAT-1996. Se seleccionaron 57 cepas de las diferentes etapas del
					proceso y se determinó el patotipo de <italic>E. Coli</italic> por reacción en
					cadena de polimerasa múltiplex: enteropatógena (EPEC), enterotoxigénica (ETEC),
					enteroinvasiva (EIEC), enteroagregativa (EAEC), enterohemorrágica (EHEC) y de
					adherencia difusa (DAEC); asimismo, se determinó su resistencia por el método de
					Kirby Bauer. Los resultados muestran una eficiencia de remoción del 95.4 %, con
					base en la demanda química de oxígeno (DBO<sub>5</sub>). Los coliformes y
						<italic>E. coli</italic> son mayores en el influente. La frecuencia total de
					patotipos fue del 39 % (22/57) de EIEC, 30 % (17/57) de ETEC y 15.5 % (9/57) de
					DAEC y EPEC. Respecto de la distribución, se detectó un 39 % de ETEC en el
					influente, 50 % de EIEC antes de la desinfección, 100 % de EIEC después de la
					desinfección y un 43 % de ETEC en el efluente. Todas las cepas muestran baja
					resistencia a los antibióticos. La eficiencia de remoción de la PTAR, con base
					en el DBO<sub>5</sub>, es alta y cumple con las normas ambientales, sin embargo,
					la presencia de patotipos diarreicos en el efluente impacta negativamente al
					ambiente y a la salud pública.</p>
			</abstract>
			<trans-abstract xml:lang="en">
				<title>ABSTRACT</title>
				<p>Water pollution is a serious environmental problem. We analyzed the presence of
					total fecal coliforms and <italic>Escherichia coli</italic>, the prevalence of
					diarrheal pathotypes, and the profiles of antibiotic resistance at different
					stages. Three composite samples from a wastewater treatment plant (WWTP) in
					Mexico were analyzed for the presence <italic>E. coli</italic> with the physical
					and chemical parameters established in the Mexican Official Standard
					NOM-001-SEMARNAT-1996. Fifty seven strains were selected from the different
					stages of the process, and the following pathotypes were determined by multiplex
					polymerase chain reaction: enteropathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC),
					enteroinvasive (EIEC), enteroaggregative (EAEC), enterohemorrhagic (EHEC), and
					diffuse adherence (DAEC). Their resistance was assessed by the Kirby Bauer
					method. The results showed a removal efficiency of 95.4% based on the chemical
					oxygen demand (BOD<sub>5</sub>). Coliforms and <italic>E. coli</italic> were
					found to be higher in the influent. The total frequency of pathotypes was 39 %
					(22/57) for EIEC, 30 % (17/57) for ETEC, and 15.5 % (9/57) for DAEC and EPEC.
					Regarding the distribution, 39% of ETEC was detected in the influent, 50% of
					EIEC before disinfection, 100% of EIEC after disinfection and 43% of ETEC in the
					effluent.</p>
			</trans-abstract>
			<kwd-group xml:lang="es">
				<title>Palabras clave:</title>
				<kwd>efluente</kwd>
				<kwd>resistencia bacteriana</kwd>
				<kwd>agua residual</kwd>
			</kwd-group>
			<kwd-group xml:lang="en">
				<title>Key words:</title>
				<kwd>effluent</kwd>
				<kwd>bacterial resistance</kwd>
				<kwd>waste water</kwd>
			</kwd-group>
			<counts>
				<fig-count count="1"/>
				<table-count count="4"/>
				<equation-count count="1"/>
				<ref-count count="56"/>
				<page-count count="10"/>
			</counts>
		</article-meta>
	</front>
	<body>
		<sec sec-type="intro">
			<title>INTRODUCCIÓN</title>
			<p>La contaminación del agua es considerada un problema ambiental emergente que ocasiona
				efectos graves en la salud humana y a los ecosistemas (<xref ref-type="bibr"
					rid="B12">Huang et al. 2006</xref>, <xref ref-type="bibr" rid="B15">Kümmerer
					2009</xref>a). Se estima que en 2025 más del 60 % de la población mundial
				sufrirá problemas de escasez de este recurso; sin embargo, el desafío en la
				actualidad es tener agua potable, debido a que miles de millones de personas están
				expuestas a diversos contaminantes y patógenos transmitidos a través de su consumo.
				En el agua, las heces de humanos y animales son la principal fuente de coliformes u
				otras bacterias patógenas, las cuales pueden dispersarse en el ambiente. Las plantas
				de tratamiento de aguas residuales (PTAR) son consideradas como una de las
				principales fuentes de contaminación por este tipo de contaminantes (<xref
					ref-type="bibr" rid="B52">US-EPA 2005</xref>, <xref ref-type="bibr" rid="B56">Ye
					y Zhang 2011</xref>, <xref ref-type="bibr" rid="B23">Novo et al. 2013</xref>).
				La ingestión de agua con restos fecales es la vía de transmisión más frecuente de
				enfermedades intestinales que afectan a las poblaciones vulnerables. En México, las
				enfermedades diarreicas ocupan uno de los primeros lugares en la
				morbilidad/mortalidad de niños menores de 5 años de edad y generan el 7.4 % de la
				demanda de consulta en los servicios de salud y el 10 % de las hospitalizaciones
				pediátricas (<xref ref-type="bibr" rid="B8">Franzolin et al. 2005</xref>). Entre los
				patógenos intestinales transmitidos por el agua, el más frecuente es la bacteria
					<italic>Escherichia coli</italic>, cuyos patotipos diarreicos son considerados
				un problema ambiental y de salud pública a nivel mundial (<xref ref-type="bibr"
					rid="B50">Sidhu y Toze 2009</xref>). Dichos patotipos de <italic>E.
					coli</italic> son: enteropatógena (EPEC), enterotoxigénica (ETEC),
				enteroinvasiva (EIEC), enteroagregativa (EAEC), enterohemorrágica (EHEC) y de
				adherencia difusa (DAEC) (<xref ref-type="bibr" rid="B22">Nataro y Kaper
				1998</xref>, <xref ref-type="bibr" rid="B54">Weintraub 2007</xref>). La ETEC causa
				diarrea acuosa en niños y adultos (<xref ref-type="bibr" rid="B49">Shaheen et al.
					2004</xref>). En México, este patotipo se ha aislado en el 70 % de los casos de
				brotes epidémicos y se asocia con zonas donde la higiene es precaria. La presencia
				de cepas patogénicas de <italic>E. coli</italic> en el agua residual se agrava por
				la capacidad de intercambiar genes de resistencia a los antibióticos a partir de
				mecanismos de transferencia horizontal.</p>
			<p>El uso y abuso de antibióticos en la comunidad, hospitales, ganadería, veterinarias y
				agricultura ha generado que se dispersen y liberen en el medio acuático y lleguen a
				las PTAR, contribuyendo a la selección y diseminación de bacterias resistentes en el
				ambiente acuático (<xref ref-type="bibr" rid="B6">Davies y Davies 2010</xref>). La
				presencia de antibióticos en el ambiente y la resistencia bacteriana es una
				preocupación mundial (<xref ref-type="bibr" rid="B28">Rodríguez et al. 2006</xref>).
				A pesar de lo anterior, este fenómeno no se ha estudiado completamente en entornos
				ambientales (<xref ref-type="bibr" rid="B19">Martí et al. 2014</xref>). Diversos
				estudios han revelado que las concentraciones subinhibitorias de antibióticos
				reportadas en ambientes acuáticos (<xref ref-type="bibr" rid="B14">Kümmerer
					2009a</xref>, <xref ref-type="bibr" rid="B15">b</xref>) pueden promover la
				resistencia bacteriana (<xref ref-type="bibr" rid="B11">Gullberg et al. 2011</xref>,
					<xref ref-type="bibr" rid="B4">Chow et al. 2015</xref>). Los residuos de
				diversos antibióticos son excretados a través de la orina y las heces (<xref
					ref-type="bibr" rid="B13">Kasprzyk-Hordern et al. 2008</xref>, <xref
					ref-type="bibr" rid="B1">Al Aukidy et al. 2012</xref>) y son liberados
				posteriormente al ambiente mediante las descargas de agua residual tratada.</p>
			<p>Las PTAR son consideradas como puntos de acceso y selección de bacterias resistentes.
				Albergan una alta densidad y diversidad de bacterias ambientales asociadas con
				humanos y animales (incluidos los patógenos), y tienen diversos factores de
				resistencia a antibióticos que pueden intercambiarse entre ellas (<xref
					ref-type="bibr" rid="B3">Bengtsson-Palme et al. 2016</xref>, <xref
					ref-type="bibr" rid="B17">Manaia et al. 2018</xref>). No obstante, el efecto del
				tratamiento de agua residual sobre la resistencia bacteriana se ha estudiado en todo
				el mundo. Varios autores han investigado la selección de resistencia bacteriana
				mediante la comparación de poblaciones de bacterias en el influente y el efluente,
				lo que ha producido resultados variables y a veces contradictorios (<xref
					ref-type="bibr" rid="B7">Flach et al. 2018</xref>). Si bien los resultados no
				siempre son consistentes, se han encontrado patrones, y en algunos casos se han
				observado aumentos de resistencia bacteriana a múltiples antibióticos (<xref
					ref-type="bibr" rid="B10">Grabow et al. 1974</xref>, <xref ref-type="bibr"
					rid="B16">Linton et al. 1974</xref>, <xref ref-type="bibr" rid="B20">Mezrioui y
					Baleux 1994</xref>).</p>
			<p>Es de suma importancia monitorear las PTAR debido a que el agua tratada que se
				descarga puede generar propagación de cepas resistentes a antibióticos de interés
				para las Instituciones de Salud Pública y ocasionar altas tasas de morbilidad y
				mortalidad para la población. Cabe mencionar que en México sólo se monitorea la
				calidad del agua con algunos parámetros físicos y químicos mínimos establecidos en
				la Norma Oficial Mexicana NOM-001-SEMARNAT-1996 (SEMARNAT 1996a); en cuanto a los
				parámetros biológicos, sólo se reportan coliformes fecales, totales y <italic>E.
					coli</italic>, pero se desconoce la presencia de los patotipos y la resistencia
				a antibióticos. Por ello el objetivo de esta investigación fue estudiar la
				prevalencia de patotipos de <italic>E. coli</italic> presentes en el agua residual
				resistentes a antibióticos en una PTAR al sur de México, con el fin de aportar datos
				sobre la misma y sugerir acciones.</p>
		</sec>
		<sec sec-type="materials|methods">
			<title>MATERIALES Y MÉTODOS</title>
			<sec>
				<title>Sitio de estudio</title>
				<p>Se seleccionó una PTAR localizada en Acapulco, Guerrero, México. Esta planta
					trata el agua residual generada por una población estimada de 800 mil
					habitantes, con una capacidad instalada de 1.35 m<sup>3</sup>/s de caudal en el
					efluente. El tratamiento consiste en un proceso biológico aeróbico a nivel
					secundario por lodos activados con desinfección por radiación UV y espesamiento
					mecánico, digestión aeróbica y deshidratación en filtros banda para los lodos.
					El tratamiento del agua residual cruda previo al biológico, consiste en la
					eliminación de la materia flotante, basura y sólidos gruesos por procedimientos
					mecánicos de desbaste grueso y fino, y la desarenación mecánica con aeración y
					extracción mecánica del material granular.</p>
			</sec>
			<sec>
				<title>Colección de muestra para los estudios bacteriológicos</title>
				<p>Se realizaron tres muestreos compuestos en la PTAR en diferentes momentos en
					enero, febrero y abril de 2018. Las muestras de agua de los diferentes procesos
					(influente, antes de la desinfección [AD] y después de la desinfección [DDE], y
					efluente) se colocaron en frascos estériles de 50 mL. Las muestras se
					mantuvieron en cadena fría durante el transporte y se analizaron en el
					laboratorio.</p>
			</sec>
			<sec>
				<title>Análisis físicos y químicos de las muestras de agua</title>
				<p>En el momento de cada muestreo se registraron in situ la temperatura, el pH y la
					conductividad eléctrica (Ce). Además, se midieron los siguientes parámetros:
					demanda química de oxígeno (DQO), demanda bioquímica de oxígeno
					(DBO<sub>5</sub>), dureza total, turbidez, sólidos suspendidos volátiles (SSV),
					sólidos suspendidos totales (SST), coliformes fecales, totales y <italic>E.
						coli</italic>, y se determinó el número más probable (NMP) con base en la
					Norma Mexicana NMX-AA-042-SCFI-2015 (<xref ref-type="bibr" rid="B42">SE
						2015a</xref>) en el laboratorio de análisis químico ambiental de la
					Universidad Autónoma de Guerrero, considerando las normas vigentes
					correspondientes (<xref ref-type="bibr" rid="B46">SEMARNAT 1996a</xref>, <xref
						ref-type="bibr" rid="B47">b</xref>, <xref ref-type="bibr" rid="B48"
						>1997</xref>). Con los datos obtenidos se calculó el porcentaje de
					eficiencia de remoción del reactor biológico (con en la DBO<sub>5</sub>):</p>
				<p>
					<disp-formula id="e1">
						<mml:math id="m1" display="block">
							<mml:mi mathvariant="normal">%</mml:mi>
							<mml:mi mathvariant="normal"> </mml:mi>
							<mml:mi>e</mml:mi>
							<mml:mi>f</mml:mi>
							<mml:mi>i</mml:mi>
							<mml:mi>c</mml:mi>
							<mml:mi>i</mml:mi>
							<mml:mi>e</mml:mi>
							<mml:mi>n</mml:mi>
							<mml:mi>c</mml:mi>
							<mml:mi>i</mml:mi>
							<mml:mi>a</mml:mi>
							<mml:mo>=</mml:mo>
							<mml:mfenced separators="|">
								<mml:mrow>
									<mml:mfrac>
										<mml:mrow>
											<mml:msub>
												<mml:mrow>
												<mml:mi>D</mml:mi>
												<mml:mi>B</mml:mi>
												<mml:mi>O</mml:mi>
												</mml:mrow>
												<mml:mrow>
												<mml:mn>5</mml:mn>
												<mml:mi> </mml:mi>
												<mml:mi>i</mml:mi>
												<mml:mi>n</mml:mi>
												<mml:mi>f</mml:mi>
												<mml:mi>l</mml:mi>
												<mml:mi>u</mml:mi>
												<mml:mi>e</mml:mi>
												<mml:mi>n</mml:mi>
												<mml:mi>t</mml:mi>
												<mml:mi>e</mml:mi>
												<mml:mi mathvariant="normal"> </mml:mi>
												</mml:mrow>
											</mml:msub>
											<mml:mo>-</mml:mo>
											<mml:msub>
												<mml:mrow>
												<mml:mi>D</mml:mi>
												<mml:mi>B</mml:mi>
												<mml:mi>O</mml:mi>
												</mml:mrow>
												<mml:mrow>
												<mml:mn>5</mml:mn>
												<mml:mi mathvariant="normal"> </mml:mi>
												<mml:mi>e</mml:mi>
												<mml:mi>f</mml:mi>
												<mml:mi>l</mml:mi>
												<mml:mi>u</mml:mi>
												<mml:mi>e</mml:mi>
												<mml:mi>n</mml:mi>
												<mml:mi>t</mml:mi>
												<mml:mi>e</mml:mi>
												<mml:mi mathvariant="normal"> </mml:mi>
												</mml:mrow>
											</mml:msub>
										</mml:mrow>
										<mml:mrow>
											<mml:msub>
												<mml:mrow>
												<mml:mi>D</mml:mi>
												<mml:mi>B</mml:mi>
												<mml:mi>O</mml:mi>
												</mml:mrow>
												<mml:mrow>
												<mml:mn>5</mml:mn>
												<mml:mi> </mml:mi>
												<mml:mi>i</mml:mi>
												<mml:mi>n</mml:mi>
												<mml:mi>f</mml:mi>
												<mml:mi>l</mml:mi>
												<mml:mi>u</mml:mi>
												<mml:mi>e</mml:mi>
												<mml:mi>n</mml:mi>
												<mml:mi>t</mml:mi>
												<mml:mi>e</mml:mi>
												<mml:mi mathvariant="normal"> </mml:mi>
												</mml:mrow>
											</mml:msub>
										</mml:mrow>
									</mml:mfrac>
								</mml:mrow>
							</mml:mfenced>
							<mml:mi mathvariant="normal"> </mml:mi>
							<mml:mn>100</mml:mn>
						</mml:math>
						<label>(1)</label>
					</disp-formula>
				</p>
				<p>donde % <italic>eficiencia</italic> es el porcentaje de eficiencia remoción de la
					PTAR; <italic>DBO</italic>
					<sub>
						<italic>5</italic>
					</sub> influente es el valor de la <italic>DBO</italic>
					<sub>
						<italic>5</italic>
					</sub> de la muestra del influente en mg/L; y <italic>DBO</italic>
					<sub>
						<italic>5</italic>
					</sub>
					<sub>
						<italic>
							<italic>efluente</italic>
						</italic>
					</sub> es el valor el valor de la <italic>DBO</italic>
					<sub>
						<italic>5</italic>
					</sub> de la muestra del efluente en mg/L.</p>
			</sec>
			<sec>
				<title><bold>Aislamiento e identificación de <italic>
							<italic>E. coli</italic>
						</italic>
					</bold></title>
				<p>Para el aislamiento de <italic>E. coli</italic> en las muestras se realizaron
					diluciones de 10<sup>-1</sup> a 10<sup>-6</sup>. De esta última dilución se
					inocularon 100 μL en cajas de Petri con agar BHI y agar MacConkey por duplicado
					y se incubaron durante 24 h a 30 ºC.</p>
				<p>Posteriormente se realizó el conteo del total de colonias en cada medio de
					cultivo y se multiplicó por la dilución correspondiente. En el agar MacConkey se
					seleccionaron al azar 10 colonias lactosa-positivas con morfología colonial de
						<italic>E. coli</italic> por muestra. Las colonias y se identificaron con el
					sistema API20E siguiendo el protocolo del fabricante. Todas las cepas
					identificadas como <italic>E. coli</italic> se conservaron en glicerol al 40 % a
					-70 ºC.</p>
			</sec>
			<sec>
				<title><bold>Detección de patotipos en las cepas de <italic>
							<italic>E. coli</italic> por PCRm</italic>
					</bold></title>
				<p>En las cepas de <italic>E. coli</italic> seleccionadas se realizó la extracción
					de ADN por el método de choque térmico como lo describen <xref ref-type="bibr"
						rid="B9">Garza-Ramos et al. (2018)</xref>. Se incluyeron cepas control para
					el estudio de los patotipos. Todas las reacciones en cadena de polimerasa
					múltiplex (PCRm, por sus siglas en inglés) fueron realizadas en un termociclador
					Biorad Mycycler TM, en un volumen final de 25 μL con el siguiente contenido por
					reacción: amortiguador, 2.5 μL; MgCl<sub>2</sub>, 2.5 μL; dNTP, 2.5 μL;
					oligonucleótido F, 2.0 μL; oligonucleótido R, 2.0 μL; H<sub>2</sub>O, 3 μL; Taq
					polimerasa, 0.5 μL partiendo de una concentración comercial de 5 U/μL. Cabe
					mencionar que en cada mix de PCRm se incluyeron dos pares de oligonucleótidos
					para la amplificación de los genes específicos por patotipo, los cuales se
					describen en el <xref ref-type="table" rid="t1">cuadro I</xref>. Las reacciones
					se sometieron a un paso de desnaturalización inicial a 95 ºC durante 1 min,
					seguido de 35 ciclos que consisten en desnaturalización a 95 ºC durante 45 s,
					hibridación a 58 ºC durante 1 min, extensión a 72 ºC durante 1 min y elongación
					final a 72 ºC durante 7 min (<xref ref-type="bibr" rid="B25">Omar y Barnard
						2010</xref>). El control positivo contenía una mezcla de cepas de <italic>E.
						coli</italic> correspondiente a los seis patotipos. El control negativo
					contenía solo agua mili Q. Los amplificados de la PCR fueron sometidos a
					electroforesis en un gel de agarosa al 1 % teñido con bromuro de etidio (3
					μL/100 mL) a 120 V por 1 h en solución amortiguadora TAE 1X. Posteriormente,
					fueron visualizados con luz UV.</p>
				<p>
					<table-wrap id="t1">
						<label>CUADRO I</label>
						<caption>
							<title>GENES DE VIRULENCIA PARA LA DETECCIÓN DE PATOTIPOS DE CEPAS DE
									<italic>Escherichia coli</italic> AISLADOS EN LA PTAR DE
								ACAPULCO, GUERRERO, MÉXICO.</title>
						</caption>
						<table frame="hsides" rules="groups">
							<colgroup>
								<col/>
								<col/>
								<col/>
								<col/>
								<col/>
							</colgroup>
							<tbody>
								<tr>
									<td align="justify">Patotipos de <italic>E. coli</italic></td>
									<td align="justify">Gen de virulencia</td>
									<td align="justify">Descripción del gen</td>
									<td align="center">Tamaño (pb)</td>
									<td align="justify">Referencia</td>
								</tr>
								<tr>
									<td align="justify">Enterotoxigénica</td>
									<td align="justify"><italic>st,</italic>
										<italic>lt</italic></td>
									<td align="justify">Toxina termoestable Toxina termolábil</td>
									<td align="center">450 191</td>
									<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B18">Margall et
											al. 1997</xref>)</td>
								</tr>
								<tr>
									<td align="justify">Enteropatógena</td>
									<td align="justify"><italic>eae</italic></td>
									<td align="justify">Fimbria (adherencia laxa al enterocito)</td>
									<td align="center">189</td>
									<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B51">Ud-Din y
											Wahid 2015</xref>)</td>
								</tr>
								<tr>
									<td align="justify">Enterohemorrágica</td>
									<td align="justify"><italic>stx1,</italic>
										<italic>stx2</italic></td>
									<td align="justify">Citotoxinas <italic>shiga</italic> (Stx1,
										Stx2)</td>
									<td align="center">418 255</td>
									<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B53">Vidal et
											al. 2002</xref>)</td>
								</tr>
								<tr>
									<td align="justify">Enteroinvasiva</td>
									<td align="justify"><italic>ipaH</italic></td>
									<td align="justify">Proteínas Ipa Complejo Mxi-Spa (adhesinas
										internalización bacteriana)</td>
									<td align="center">619</td>
									<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B55">Weiler et
											al. 2017</xref>)</td>
								</tr>
								<tr>
									<td align="justify">Adherencia difusa</td>
									<td align="justify"><italic>daA</italic></td>
									<td align="justify">Gen conservado (operón daA) que regula la
										expresión de la adhesina F1845</td>
									<td align="center">146</td>
									<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B27">Riveros et
											al. 2011</xref>)</td>
								</tr>
								<tr>
									<td align="justify">Enteroagregativa</td>
									<td align="justify"><italic>aggR</italic></td>
									<td align="justify">Gen activador transcripcional, regulador de
										los genes que codifican para fimbrias de adherencia
										agregativa (AAF)</td>
									<td align="center">152</td>
									<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B21">Morín et
											al. 2013</xref>)</td>
								</tr>
							</tbody>
						</table>
					</table-wrap>
				</p>
			</sec>
			<sec>
				<title><bold>Detección de la resistencia antimicrobiana en las cepas de <italic>
							<italic>E. coli</italic>
						</italic>
					</bold></title>
				<p>Se realizó la prueba de sensibilidad antimicrobiana utilizando el método de
					difusión de disco estándar en agar Müeller-Hinton (MH) según lo recomendado por
					el Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (<xref ref-type="bibr"
						rid="B5">CLSI 2018</xref>). Se recogieron colonias frescas (aproximadamente
					18 h) de placas de cultivo de agar nutritivo en tubos de ensayo que contenían 5
					mL de solución salina estéril. La turbidez de la suspensión se ajustó a 0.5 del
					estándar de McFarland. Se utilizaron hisopos estériles para la dispersión de la
					suspensión bacteriana en cajas de Petri con agar MH. Se utilizaron los
					siguientes discos impregnados con antibióticos: amikacina (AK, 30 µg),
					gentamicina (CN, 10 µg), meropenem (ME, 10 µg), tetraciclina (TE, 30 µg),
					levofloxacino (LEV, 5 µg), claritromicina (CLR, 15 µg),
					trimetoprima/sulfametaxol (SXT 25, µg), amoxicilina (AMC, 30 µg), ciprofloxacino
					(CIP, 5 µg), ceftazidima (CAZ, 30 µg), cefotaxima (CTX, 30 µg), ceftriaxona
					(CRO, 30 µg) y cloranfenicol (CL, 30 µg). Asimismo, se hizo el ensayo de
					detección de betalactamasas de espectro extendido (BLEE, por sus siglas en
					inglés) en las cepas que fueron resistentes a cefalosporinas de
					terceravgeneración por el método de doble disco. Todos los resultados se
					interpretaron de acuerdo con el m étodo recomendado por el <xref ref-type="bibr"
						rid="B5">CLSI (2018)</xref>.</p>
			</sec>
		</sec>
		<sec sec-type="results|discussion">
			<title>RESULTADOS Y DISCUSIÓN</title>
			<p>En la actualidad se requieren datos más precisos acerca de cada componente de la
				interfaz humano-ambiente que contribuyan a la epidemiología de <italic>E.
					coli,</italic> ya que pueden existir reservorios importantes sin identificar
				como los efluentes de las PTAR. En este estudio se analizó una PTAR urbana cuya
				eficiencia de remoción es de 95.4 %, que es una de las plantas de tratamiento modelo
				con las que cuenta México. Cabe mencionar que todos los parámetros físicos y
				químicos evaluados en el <xref ref-type="table" rid="t2">cuadro II</xref> se
				encuentran dentro de los límites permisible establecidos por la
				NOM-001-SEMARNAT-1996 (SEMARNAT 1996a) para determinar la calidad del agua. Es
				importante destacar que existen pocas PTAR que cumplen con la normativa vigente
					(<xref ref-type="table" rid="t3">Cuadro III</xref>).</p>
			<p>
				<table-wrap id="t2">
					<label>CUADRO II</label>
					<caption>
						<title>PARÁMETROS FÍSICOS Y QUÍMICOS EN EL INFLUENTE Y EFLUENTE DE LA PTAR
							DE ACAPULCO, GUERRERO, MÉXICO.</title>
					</caption>
					<table frame="hsides" rules="groups">
						<colgroup>
							<col/>
							<col/>
							<col/>
							<col/>
							<col/>
						</colgroup>
						<tbody>
							<tr>
								<td align="justify">Parámetro</td>
								<td align="center">Influente compuesto</td>
								<td align="center">Efluente compuesto</td>
								<td align="justify">Norma</td>
								<td align="justify">Referencia</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">T (°C) </td>
								<td align="center">29.17</td>
								<td align="center">31.30</td>
								<td align="justify">NMX-AA-007-SCFI-2013 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B38">SE
									2013a</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">pH </td>
								<td align="center">6.99</td>
								<td align="center">6.55</td>
								<td align="justify">NMX-AA-008-SCFI-2016 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B44">SE
									2016a</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">CE (µs/cm) </td>
								<td align="center">1788.33</td>
								<td align="center">490.25</td>
								<td align="justify">NMX-AA-093-SCFI-2000 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B45">SE
									2016b</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">DBO5 (mg/L) </td>
								<td align="center">1625.17</td>
								<td align="center">22.56</td>
								<td align="justify">NMX-AA-028-SCFI-2001 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B30">SE
									2001a</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">DQO (mg/L) </td>
								<td align="center">1065.76</td>
								<td align="center">51.27</td>
								<td align="justify">NMX-AA-030-SCFI-2012 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B37">SE
									2012</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">S.S.V (mg/L) </td>
								<td align="center">352.42</td>
								<td align="center">496.37</td>
								<td align="justify">NMX-AA-034-SCFI-2015 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B43">SE
									2015b</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">S.S.T. (mg/L) </td>
								<td align="center">19.08</td>
								<td align="center">26.64</td>
								<td align="justify">NMX-AA-034-SCFI-2015 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B43">SE
									2015b</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">S.S. (mg/L) </td>
								<td align="center">20</td>
								<td align="center">0</td>
								<td align="justify">NMX-AA-004-SCFI-2013 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B39">SE
									2013b</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">M.F </td>
								<td align="center">Ausente</td>
								<td align="center">Ausente</td>
								<td align="justify">NMX-AA-004-SCFI-2013 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B39">SE
									2013b</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">Ntotal (mg/L) </td>
								<td align="center">-</td>
								<td align="center">10.7</td>
								<td align="justify">NMX-AA-026-SCFI-2010 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B36">SE
									2010</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">Ptotal (mg/L) </td>
								<td align="center">-</td>
								<td align="center">2.56</td>
								<td align="justify">NMX-AA-029-SCFI-2001 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B31">SE
									2001b</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">Alctotal (mg/L) </td>
								<td align="center">825.46</td>
								<td align="center">201.20</td>
								<td align="justify">NMX-AA-036-SCFI-2001 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B32">SE
									2001c</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">Cloruros (mg/L) </td>
								<td align="center">956.45</td>
								<td align="center">98.74</td>
								<td align="justify">NMX-AA-073-SCFI-2001 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B33">SE
									2001d</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">Dureza total (mg/L) </td>
								<td align="center">789.61</td>
								<td align="center">225.32</td>
								<td align="justify">NMX-AA-072-SCFI-2001 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B34">SE
									2001e</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">Grasas y Aceites (mg/L) </td>
								<td align="center">-</td>
								<td align="center">6.18</td>
								<td align="justify">NMX-AA-005-SCFI-2000 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B40">SE
									2013c</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">SO4 (mg/L) </td>
								<td align="center">596.24</td>
								<td align="center">24.14</td>
								<td align="justify">NMX-AA-074-SCFI-2014 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B41">SE
									2014</xref>)</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">Turbidez (UNT) </td>
								<td align="center">70</td>
								<td align="center">2</td>
								<td align="justify">NMX-AA-038-SCFI-2001 </td>
								<td align="justify">(<xref ref-type="bibr" rid="B35">SE
									2001f</xref>)</td>
							</tr>
						</tbody>
					</table>
					<table-wrap-foot>
						<fn id="TFN1">
							<p>T: temperatura, pH: potencial de hidrogeno, CE: conductividad
								eléctrica, DBO<sub>5</sub>: demanda bioquímica de oxígeno, DQO:
								demanda química de oxígeno, SSV: sólidos suspendidos volátiles, SST:
								sólidos suspendidos totales, SS: sólidos suspendidos, MF: materia
								fecal, Ntotal: nitrógeno total, Ptotal: fósforo total, Alctotal:
								alcalinidad total, SO<sub>4</sub>: sulfatos.</p>
						</fn>
					</table-wrap-foot>
				</table-wrap>
			</p>
			<p>
				<table-wrap id="t3">
					<label>CUADRO III</label>
					<caption>
						<title>NMP DE ORGANISMOS COLIFORMES TOTALES, FECALES y <italic>Escherichia
								coli</italic> EN LAS DIFERENTES ETAPAS DE TRATAMIENTOS DE LA PTAR DE
							ACAPULCO, GUERRERO, MÉXICO.</title>
					</caption>
					<table frame="hsides" rules="groups">
						<colgroup>
							<col/>
							<col/>
							<col/>
							<col/>
						</colgroup>
						<tbody>
							<tr>
								<td align="justify">Muestra </td>
								<td align="center">Organismos coliformes totales</td>
								<td align="center">Organismos coliformes fecales</td>
								<td align="center"><italic>E. coli</italic> confirmativa</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">INFLUENTE</td>
								<td align="center">≥ 2 400</td>
								<td align="center">1100</td>
								<td align="center">160</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">AD </td>
								<td align="center">240</td>
								<td align="center">20</td>
								<td align="center">19</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">DDE </td>
								<td align="center">93</td>
								<td align="center">21</td>
								<td align="center">16</td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">EFLUENTE </td>
								<td align="center">93</td>
								<td align="center">15</td>
								<td align="center">11</td>
							</tr>
						</tbody>
					</table>
					<table-wrap-foot>
						<fn id="TFN2">
							<p>NMP: número más probable, AD: antes de la desinfección, DDE: después
								de la desinfección (interpretación con base en la
								NOM-001-SEMARNAT-1996 (<xref ref-type="bibr" rid="B46">SEMARNAT
									1996a</xref>).</p>
						</fn>
					</table-wrap-foot>
				</table-wrap>
			</p>
			<p>No obstante, a pesar de cumplir con la normativa nacional vigente, hay una presencia
				importante de coliformes fecales y totales en el efluente, la cual disminuye después
				de la desinfección con luz UV, como se aprecia en el <xref ref-type="table" rid="t3"
					>cuadro III</xref>. Estos datos coinciden con investigaciones realizadas por
					<xref ref-type="bibr" rid="B7">Flach et al. (2018)</xref>, quienes investigaron
				la presencia de <italic>E. coli</italic> en el influente y efluente en una PTAR en
				Suecia durante 18 meses, y observaron que el número de aislamientos era mucho mayor
				en el influente que en el efluente. Asimismo, <xref ref-type="bibr" rid="B2"
					>Anastasi et al. (2013)</xref> describieron la sobrevivencia de cepas de
					<italic>E. coli</italic> aun después del proceso de desinfección con luz UV y
				cloración en una PTAR.</p>
			<p>En cuanto a la presencia de <italic>E. coli</italic>, se aislaron 320 cepas y de
				éstas se seleccionaron al azar 57 para estudir los patotipos y la resistencia a
				diversos antibióticos; de ellas, 18 pertenecían al influente, 12 a la etapa previa
				al proceso de desinfección, 13 a la etapa posterior al proceso de desinfección y 14
				al efluente.</p>
			<p>En estudios similares se ha observado que las cepas de <italic>E. coli</italic> se
				encuentran presentes en todo el sistema de tratamiento de las PTAR, probablemete por
				mecanismos de tolerancia o resistencia a los tratamientos de desinfección empleados
				en los procesos de tratamiento. Asimismo, se ha reportado su capacidad de sobrevivir
				en ambientes estresantes y hostiles (<xref ref-type="bibr" rid="B2">Anastasi et al.
					2013</xref>, <xref ref-type="bibr" rid="B7">Flach et al. 2018</xref>).</p>
			<p>La frecuencia de patotipos de las cepas de <italic>E. coli</italic> en la PTAR fue de
				39 % (22/57) para EIEC, 30 % (17/57) para ETEC y 15.5 % (9/57) para DAEC y EPEC. En
				cuanto a la distribución en los sitios de muestreo, se detectó un 39 % de ETEC en el
				influente, 50 % de EIEC antes de la desinfección, 100 % de EIEC después de la
				desinfección y un 43 % de ETEC en el efluente, como se muestra en el <xref
					ref-type="table" rid="t4">cuadro IV</xref>.</p>
			<p>
				<table-wrap id="t4">
					<label>CUADRO IV</label>
					<caption>
						<title>PREVALENCIA DE PATOTIPOS Y RESISTENCIA A LOS ANTIBIÓTICOS EN CEPAS DE
								<italic>Escherichia coli</italic> AISLADAS EN LA PTAR DE ACAPULCO,
							GUERRERO, MÉXICO.</title>
					</caption>
					<table frame="hsides" rules="groups">
						<colgroup>
							<col/>
							<col/>
							<col/>
						</colgroup>
						<tbody>
							<tr>
								<td align="justify">Sitio PTAR </td>
								<td align="justify">Patotipos (%) </td>
								<td align="justify">Resistencia a antibióticos (%) </td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">Influente (n = 18) </td>
								<td align="justify">DAEC: 22 % (4), EIEC: 11 % (2), EPEC: 28 % (5),
										<bold>ETEC: 39 % (7)</bold></td>
								<td align="justify">AK: 11 % (2), SXT: 44 % (8), CTX: 22 % (4), CRO:
									22 % (4), CL: 11 % (2) </td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">AD (n = 12) </td>
								<td align="justify">DAEC: 8 % (1), <bold>EIEC: 50 % (6)</bold>,
									EPEC: 8 % (1), ETEC: 33 % (4) </td>
								<td align="justify">SXT: 33 %, CXT: 42 %, CXT- CLA: 25 %, MEM: 42 %,
									CL: 25 % </td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">DDE (n = 13) </td>
								<td align="justify">EIEC: 100 % (13)</td>
								<td align="justify">GN23: %, AK: 15 %, SXT: 31 %, CAZ: 23 %, CXT: 31
									%, CXT-CLA: 15 %, MEM: 23 % </td>
							</tr>
							<tr>
								<td align="justify">Efluente (n = 14) </td>
								<td align="justify">DAEC: 27 % (4), EIEC: 7 % (1), EPEC: 21 % (3),
										<bold>ETEC: 43 % (6)</bold></td>
								<td align="justify">AMC, TE, CXT-CLA, CRO, MEM y CL: 14 %, SXT: 38
									%, CXT: 28 % </td>
							</tr>
						</tbody>
					</table>
					<table-wrap-foot>
						<fn id="TFN3">
							<p>AD: antes de la desinfección, DDE: después de la desinfección, DAEC:
								difusamente adherente, EIEC: enteroinvasiva, EPEC: enteropatogénica,
								ETEC: enterotoxigénica, AK: amikacina, SXT:
								trimetoprima/sulfametoxazol, CXT: cefotaxima, CRO: ceftriaxona, CL:
								cloranfenicol, GN: gentamicina, CAZ: ceftazidima, CXT-CLA:
								cefotaxima/ácido clavulánico, AMC: amoxacilina/ácido clavulánico,
								MEM: meropenem, TE: tetraciclina.</p>
						</fn>
					</table-wrap-foot>
				</table-wrap>
			</p>
			<p>Respecto a la sobrevivencia de cepas de <italic>E. coli</italic>, se ha reportado que
				1 × 10<sup>2</sup> UFC/mL sobreviven a los tratamientos empleados para la
				desinfección del agua, ya que pueden tener o transferirse genes que les ayudan a
				sobrevivir y proliferar en ambientes acuáticos (<xref ref-type="bibr" rid="B26"
					>Reinthaler et al. 2003</xref>). Asimismo, se ha demostrado la ineficiencia del
				tratamiento con radiación UV contra coliformes fecales, ya que las bacterias tienen
				la capacidad de reparar y revertir los efectos negativos sobre su ADN. Esto ocurre
				cuando las dosis de radiación UV son bajas y los tiempos de exposición son cortos
				según lo reportado por <xref ref-type="bibr" rid="B24">Okoh et al. (2007)</xref>.
				Con relación a la desinfección con cloro, esta puede ser más efectiva para inactivar
				a las bacterias, pero se han encontrado cepas de <italic>E. coli</italic> que pueden
				sobrevivir en agua clorada. Dentro de los patotipos de <italic>E. coli</italic> que
				pueden resistir los procesos de desinfección en las PTAR se encuentran las
				uropatogénicas (UPEC), de acuerdo con estudios realizados por <xref ref-type="bibr"
					rid="B2">Anastasi et al. (2013)</xref>.</p>
			<p>Las cepas analizadas en este estudio fueron sensibles a diversos antibióticos, a
				saber: 93 % a tetraciclina; 80 % a levofloxacino, gentamicina, amoxacilina,
				ceftriaxona y amikacina; 77 % a cloranfenicol; 68 % a ceftazidima; 65 % a
				cefotaxima, y 60 % a meropenem y trimetoprima/sulfametoxazol. Ninguna tuvo la
				capacidad de producir BLEE. Las cepas con mayor resistencia a antibióticos se
				detectaron después del proceso de desinfección y en el efluente (<xref
					ref-type="table" rid="t4">Cuadro IV</xref>). En un estudio exhaustivo, <xref
					ref-type="bibr" rid="B7">Flach et al. (2018)</xref> detectaron la presencia de
					<italic>E. coli</italic> en una PTAR con mayor capacidad de tratamiento que la
				estudiada en esta investigación, indicando que no hay selección de resistencia
				bacteriana; sin embargo, se demostró la resistencia a siete antibióticos evaluados
				con un mismo comportamiento en el influente y el efluente, lo cual puede deberse a
				la presencia de trazas de antibióticos en el agua.</p>
			<p>A pesar que se detectaron algunos antibióticos en concentraciones que pudieron haber
				ejercido presión selectiva sobre los perfiles de resistencia de <italic>E.
					coli</italic>, no se observó correlación alguna. Cabe mencionar que los
				resultados de <xref ref-type="bibr" rid="B7">Flach et al. (2018)</xref> son
				contradictorios con otros autores (e.g., <xref ref-type="bibr" rid="B6">Davies y
					Davies 2010</xref>). <xref ref-type="bibr" rid="B6">Davies y Davies
					(2010)</xref>, mencionan que la selección de bacterias resistentes a
				antibióticos puede estar relacionada con la presencia de trazas de estos fármacos o
				metabolitos secundarios que promueven la selección de cepas resistentes, ya sea por
				mutaciones o por transferencia horizontal de genes de resistencia con otros
				microorganismos en diversos ambientes.Por ello la convivencia de cepas de <italic>E.
					coli</italic> con trazas de antibióticos y otros microorganismos resistentes en
				las PTAR conduce a la posible selección de cepas de diversos patotipos de <italic>E.
					coli</italic> resistentes a antibióticos, lo cual representan un peligro
				inminente para la salud ambiental y humana (<xref ref-type="fig" rid="f1">Fig.
					1</xref>).</p>
			<p>
				<fig id="f1">
					<label>Fig. 1</label>
					<caption>
						<title>Diagrama de flujo de la presencia de patotipos y selección de cepas
							resistentes de <italic>Escherichia coli</italic> en todos los procesos
							de tratamiento del agua en la PTAR de Acapulco, Guerrero,
							México.</title>
					</caption>
					<graphic xlink:href="0188-4999-rica-36-04-957-gf1.png"/>
				</fig>
			</p>
			<p>Cabe mencionar que en el efluente se repiten los patotipos que se detectaron en el
				influente, prácticamente en la misma proporción (<xref ref-type="table" rid="t4"
					>Cuadro IV</xref>), por lo tanto, los procesos de desinfección no son efectivos
				con relación a estas bacterias y la remoción de antibióticos es baja o nula en esta
				PTAR. Los datos observados en esta investigación indican que las bacterias patógenas
				no se remueven en su totalidad, por lo que deben diseñarse estrategias de remoción
				para eliminarlas o retenerlas dentro del sistema de tratamiento. Además, se sugiere
				evaluar el tratamiento de fotocatálisis heterogénea TiO<sub>2</sub> propuesto por
					<xref ref-type="bibr" rid="B29">Rojas-Higuera et al. (2010)</xref> como un
				método eficaz para la remoción de coliformes y <italic>E. coli</italic> en agua
				residual.</p>
			<p>La importancia de monitorear las PTAR continuamente radica en que el agua tratada
				podría reutilizarse para actividades domésticas (e.g., riego de áreas verdes, entre
				otras), además de aprovecharse para labores agrícolas; sin embargo, esto podría
				conducir a la dispersión de cepas potencialmente patógenas en el ambiente. La
				eficiencia de las PTAR se ha minimizado a conocer los parámetros físicos, químicos y
				bacteriológicos, sin considerar la presencia de patotipos resistentes a antibióticos
				en cepas de <italic>E. coli</italic>, que aumentan la morbilidad/mortalidad y
				ocasionan la disminución de los tratamientos disponibles y el control de casos.</p>
		</sec>
		<sec sec-type="conclusions">
			<title>CONCLUSIÓN</title>
			<p>Los resultados demuestran la persistencia de patotipos diarreicos en las cepas de
					<italic>E. coli</italic> y su resistencia a ciertos antibióticos en los
				diferentes procesos de tratamiento de las PTAR. Por ello es necesario evaluar
				procesos adicionales que tengan la capacidad de eliminar este tipo de bacterias
				presentes en el agua residual tratada, con el fin de evitar el desequilibrio en el
				medio acuático y afectaciones a la salud humana y el ambiente.</p>
		</sec>
	</body>
	<back>
		<ack>
			<title>AGRADECIMIENTOS</title>
			<p>Queremos agradecer a Enrique Jesús Munguía Flores por su apoyo en el muestreo y
				procesamiento de las muestras de este proyecto.</p>
		</ack>
		<ref-list>
			<title>REFERENCIAS</title>
			<ref id="B1">
				<mixed-citation>Al Aukidy M., Verlicchi P., Jelic A., Petrovic M. y Barceló D.
					(2012). Monitoring release of pharmaceutical compounds: Occurrence and
					environmental risk assessment of two WWTP effluents and their receiving bodies
					in the Po Valley, Italy. Sci. Total Environ. 438, 15-25.
					https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2012.08.061</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Al Aukidy</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Verlicchi</surname>
							<given-names>P.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Jelic</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Petrovic</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Barceló</surname>
							<given-names>D.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2012</year>
					<article-title>Monitoring release of pharmaceutical compounds: Occurrence and
						environmental risk assessment of two WWTP effluents and their receiving
						bodies in the Po Valley, Italy</article-title>
					<source>Sci. Total Environ.</source>
					<volume>438</volume>
					<fpage>15</fpage>
					<lpage>25</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi"
						>https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2012.08.061</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B2">
				<mixed-citation>Anastasi E.M., Wohlsen T.D., Stratton H.M. y Katouli M. (2013).
					Survival of <italic>Escherichia coli</italic> in two sewage treatment plants
					using UV irradiation and chlorination for disinfection. Water Res. 47 (17),
					6670-6679. https://doi.org/10.1016/j.watres.2013.09.008</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Anastasi</surname>
							<given-names>E.M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Wohlsen</surname>
							<given-names>T.D.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Stratton</surname>
							<given-names>H.M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Katouli</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2013</year>
					<article-title>Survival of Escherichia coli in two sewage treatment plants using
						UV irradiation and chlorination for disinfection</article-title>
					<source>Water Res.</source>
					<volume>47</volume>
					<issue>17</issue>
					<fpage>6670</fpage>
					<lpage>6679</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1016/j.watres.2013.09.008</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B3">
				<mixed-citation>Bengtsson-Palme J., Hammarén R., Pal, C., Östman M., Björlenius B.,
					Flach C.F. y Larsson D.J. (2016). Elucidating selection processes for antibiotic
					resistance in sewage treatment plants using metagenomics. Sci. Total Environ.
					572, 697-712. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2016.06.228</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Bengtsson-Palme J.</surname>
							<given-names>Hammarén R.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Pal</surname>
							<given-names>C.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Östman M.</surname>
							<given-names>Björlenius B.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Flach C.F.</surname>
							<given-names>Larsson D.J.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2016</year>
					<article-title>Elucidating selection processes for antibiotic resistance in
						sewage treatment plants using metagenomics</article-title>
					<source>Sci. Total Environ.</source>
					<volume>572</volume>
					<fpage>697</fpage>
					<lpage>712</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi"
						>https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2016.06.228</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B4">
				<mixed-citation>Chow L., Waldron L. y Gillings M. (2015). Potential impacts of
					aquatic pollutants: subclinical antibiotic concentrations induce genome changes
					and promote antibiotic resistance. Front. Microbiol. 6, 803.
					https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.00803</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Chow</surname>
							<given-names>L.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Waldron</surname>
							<given-names>L.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Gillings</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2015</year>
					<article-title>Potential impacts of aquatic pollutants: subclinical antibiotic
						concentrations induce genome changes and promote antibiotic
						resistance</article-title>
					<source>Front. Microbiol.</source>
					<volume>6</volume>
					<fpage>803</fpage>
					<lpage>803</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.00803</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B5">
				<mixed-citation>CLSI (2018). Performance standards for antimicrobial susceptibility
					testing. 28th ed. Supplement M100. Clinical and Laboratory Standards Institute,
					Wayne, PA, EUA, 296 pp.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="book">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>CLSI</collab>
					</person-group>
					<year>2018</year>
					<source>Performance standards for antimicrobial susceptibility testing</source>
					<edition>28th </edition>
					<supplement>Supplement M100</supplement>
					<publisher-name>Clinical and Laboratory Standards Institute</publisher-name>
					<publisher-loc>Wayne, PA, EUA</publisher-loc>
					<fpage>296</fpage>
					<lpage>296</lpage>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B6">
				<mixed-citation>Davies J. y Davies D. (2010). Origins and evolution of antibiotic
					resistance. Microbiol. Mol. Biol. R. 74 (3), 417-433.
					https://doi.org/10.1128/MMBR.00016-10</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Davies</surname>
							<given-names>J.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Davies</surname>
							<given-names>D.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2010</year>
					<article-title>Origins and evolution of antibiotic resistance</article-title>
					<source>Microbiol. Mol. Biol. R.</source>
					<volume>74</volume>
					<issue>3</issue>
					<fpage>417</fpage>
					<lpage>433</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1128/MMBR.00016-10</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B7">
				<mixed-citation>Flach C.F., Genheden M., Fick J. y Joakim-Larsson D.G. (2018). A
					comprehensive screening of <italic>Escherichia coli</italic> isolates from
					Scandinavia’s largest sewage treatment plant indicates no selection for
					antibiotic resistance. Environ. Sci. Technol. 52 (19), 11419-11428.
					https://doi.org/10.1021/acs.est.8b03354</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Flach</surname>
							<given-names>C.F.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Genheden</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Fick</surname>
							<given-names>J.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Joakim-Larsson</surname>
							<given-names>D.G.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2018</year>
					<article-title>A comprehensive screening of Escherichia coli isolates from
						Scandinavia’s largest sewage treatment plant indicates no selection for
						antibiotic resistance</article-title>
					<source>Environ. Sci. Technol.</source>
					<volume>52</volume>
					<issue>19</issue>
					<fpage>11419</fpage>
					<lpage>11428</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1021/acs.est.8b03354</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B8">
				<mixed-citation>Franzolin M.R., Alves R.C., Keller R., Gomes T.A., Beutin L.,
					Barreto M., Milroy C., Strina A., Ribeiro H. y Trabulsi L. (2005). Prevalence of
					diarrheagenic <italic>Escherichia coli</italic> in children with diarrhea in
					Salvador, Bahia, Brazil. Mem. I. Oswaldo Cruz. 100 (4), 359-363.
					https://doi.org/10.1590/S0074-02762005000400004 </mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Franzolin</surname>
							<given-names>M.R.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Alves</surname>
							<given-names>R.C.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Keller</surname>
							<given-names>R.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Gomes</surname>
							<given-names>T.A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Beutin</surname>
							<given-names>L.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Barreto</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Milroy</surname>
							<given-names>C.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Strina</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Ribeiro</surname>
							<given-names>H.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Trabulsi</surname>
							<given-names>L.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2005</year>
					<article-title>Prevalence of diarrheagenic Escherichia coli in children with
						diarrhea in Salvador, Bahia, Brazil</article-title>
					<source>Mem. I. Oswaldo Cruz.</source>
					<volume>100</volume>
					<issue>4</issue>
					<fpage>359</fpage>
					<lpage>363</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi"
						>https://doi.org/10.1590/S0074-02762005000400004</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B9">
				<mixed-citation>Garza-Ramos U., Barrios-Camacho H., Moreno-Domínguez S.,
					Toribio-Jiménez J., Jardón-Pineda D., Cuevas-Peña J., Sánchez-Pérez A.,
					Durán-Bedolla J., Olguín-Rodríguez J. y Román-Román A. (2018). Phenotypic and
					molecular characterization of <italic>Klebsiella spp</italic>. isolates causing
					community-acquired infections. New Microbes New Infect. 23, 17-27
					https://doi.org/10.1016/j.nmni.2018.02.002</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Garza-Ramos</surname>
							<given-names>U.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Barrios-Camacho</surname>
							<given-names>H.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Moreno-Domínguez</surname>
							<given-names>S.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Toribio-Jiménez</surname>
							<given-names>J.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Jardón-Pineda</surname>
							<given-names>D.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Cuevas-Peña</surname>
							<given-names>J.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Sánchez-Pérez</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Durán-Bedolla</surname>
							<given-names>J.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Olguín-Rodríguez</surname>
							<given-names>J.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Román-Román</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2018</year>
					<article-title>Phenotypic and molecular characterization of Klebsiella spp.
						isolates causing community-acquired infections</article-title>
					<source>New Microbes New Infect.</source>
					<volume>23</volume>
					<fpage>17</fpage>
					<lpage>27</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1016/j.nmni.2018.02.002</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B10">
				<mixed-citation>Grabow W.O.K., Prozesky O.W. y Smith L.S. (1974). Drug resistant
					coliforms call for review of water quality standards. Water Res. 8 (1), 1-9.
					https://doi.org/10.1016/0043-1354(74)90002-5</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Grabow</surname>
							<given-names>W.O.K.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Prozesky</surname>
							<given-names>O.W.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Smith</surname>
							<given-names>L.S.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>1974</year>
					<article-title>Drug resistant coliforms call for review of water quality
						standards</article-title>
					<source>Water Res.</source>
					<volume>8</volume>
					<issue>1</issue>
					<fpage>1</fpage>
					<lpage>9</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1016/0043-1354(74)90002-5</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B11">
				<mixed-citation>Gullberg E., Cao S., Berg O.G., Ilbäck C., Sandegren L., Hughes D. y
					Andersson D.I. (2011). Selection of resistant bacteria at very low antibiotic
					concentrations. PLOS Pathog. 7 (7).
					https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1002158</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Gullberg</surname>
							<given-names>E.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Cao</surname>
							<given-names>S.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Berg</surname>
							<given-names>O.G.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Ilbäck</surname>
							<given-names>C.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Sandegren</surname>
							<given-names>L.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Hughes</surname>
							<given-names>D.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Andersson</surname>
							<given-names>D.I.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2011</year>
					<article-title>Selection of resistant bacteria at very low antibiotic
						concentrations</article-title>
					<source>PLOS Pathog.</source>
					<volume>7</volume>
					<issue>7</issue>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1002158</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B12">
				<mixed-citation>Huang D.B., Mohanty A., DuPont H.L., Okhuysen P.C. y Chiang T.
					(2006). A review of an emerging enteric pathogen: Enteroaggregative
						<italic>Escherichia coli</italic>. J. Med. Microbiol. 55 (10), 1303-1311.
					https://doi.org/10.1099/jmm.0.46674-0</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Huang</surname>
							<given-names>D.B.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Mohanty</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>DuPont</surname>
							<given-names>H.L.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Okhuysen</surname>
							<given-names>P.C.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Chiang</surname>
							<given-names>T.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2006</year>
					<article-title>A review of an emerging enteric pathogen: Enteroaggregative
						Escherichia coli</article-title>
					<source>J. Med. Microbiol.</source>
					<volume>55</volume>
					<issue>10</issue>
					<fpage>1303</fpage>
					<lpage>1311</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1099/jmm.0.46674-0</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B13">
				<mixed-citation>Kasprzyk-Hordern B., Dinsdale R.M. y Guwy A.J. (2008). The
					occurrence of pharmaceuticals, personal care products, endocrine disruptors and
					illicit drugs in surface water in South Wales, UK. Water Res. 42 (13),
					3498-3518. https://doi.org/10.1016/j.watres.2008.04.026</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Kasprzyk-Hordern</surname>
							<given-names>B.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Dinsdale</surname>
							<given-names>R.M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Guwy</surname>
							<given-names>A.J.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2008</year>
					<article-title>The occurrence of pharmaceuticals, personal care products,
						endocrine disruptors and illicit drugs in surface water in South Wales,
						UK</article-title>
					<source>Water Res.</source>
					<volume>42</volume>
					<issue>13</issue>
					<fpage>3498</fpage>
					<lpage>3518</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1016/j.watres.2008.04.026</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B14">
				<mixed-citation>Kümmerer K. (2009a). Antibiotics in the aquatic environment - A
					review - Part I. Chemosphere 75 (4), 417-434.
					https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2008.11.086</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Kümmerer</surname>
							<given-names>K.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2009</year>
					<article-title>Antibiotics in the aquatic environment - A review - Part
						I</article-title>
					<source>Chemosphere</source>
					<volume>75</volume>
					<issue>4</issue>
					<fpage>417</fpage>
					<lpage>434</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi"
						>https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2008.11.086</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B15">
				<mixed-citation>Kümmerer K. (2009b). Antibiotics in the aquatic environment - A
					review - Part II. Chemosphere 75 (4), 435-441.
					https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2008.12.006</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Kümmerer</surname>
							<given-names>K.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2009</year>
					<article-title>Antibiotics in the aquatic environment - A review - Part
						II</article-title>
					<source>Chemosphere</source>
					<volume>75</volume>
					<issue>4</issue>
					<fpage>435</fpage>
					<lpage>441</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi"
						>https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2008.12.006</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B16">
				<mixed-citation>Linton K.B., Richmond M.H., Bevan R. y Gillespie W.A. (1974).
					Antibiotic resistance and R factors in coliform bacilli isolated from hospital
					and domestic sewage. J. Med. Microbiol. 7 (1), 91-103.
					https://doi.org/10.1099/00222615-7-1-91</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Linton</surname>
							<given-names>K.B.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Richmond</surname>
							<given-names>M.H.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Bevan</surname>
							<given-names>R.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Gillespie</surname>
							<given-names>W.A.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>1974</year>
					<article-title>Antibiotic resistance and R factors in coliform bacilli isolated
						from hospital and domestic sewage</article-title>
					<source>J. Med. Microbiol.</source>
					<volume>7</volume>
					<issue>1</issue>
					<fpage>91</fpage>
					<lpage>103</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1099/00222615-7-1-91</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B17">
				<mixed-citation>Manaia C.M., Rocha J., Scaccia N., Marano R., Radu E., Biancullo F.,
					Cerqueira F., Fortunato G., Iakovides I., Kampouris I., Vaz-Moreira I. y Nunes
					O. (2018). Antibiotic resistance in wastewater treatment plants: Tackling the
					black box. Environ. Int. 115, 312-324.
					https://doi.org/10.1016/j.envint.2018.03.044</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Manaia</surname>
							<given-names>C.M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Rocha</surname>
							<given-names>J.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Scaccia</surname>
							<given-names>N.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Marano</surname>
							<given-names>R.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Radu</surname>
							<given-names>E.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Biancullo</surname>
							<given-names>F.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Cerqueira</surname>
							<given-names>F.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Fortunato</surname>
							<given-names>G.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Iakovides</surname>
							<given-names>I.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Kampouris</surname>
							<given-names>I.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Vaz-Moreira</surname>
							<given-names>I.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Nunes</surname>
							<given-names>O.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2018</year>
					<article-title>Antibiotic resistance in wastewater treatment plants: Tackling
						the black box</article-title>
					<source>Environ. Int.</source>
					<volume>115</volume>
					<fpage>312</fpage>
					<lpage>324</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1016/j.envint.2018.03.044</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B18">
				<mixed-citation>Margall N., Domínguez À., Prats G. y Salleras L. (1997).
						<italic>Escherichia coli</italic> enterohemorrágica. Rev. Esp. Salud Públic.
					71 (5), 437-443.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Margall</surname>
							<given-names>N.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Domínguez</surname>
							<given-names>À.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Prats</surname>
							<given-names>G.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Salleras</surname>
							<given-names>L.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>1997</year>
					<article-title>Escherichia coli enterohemorrágica</article-title>
					<source>Rev. Esp. Salud Públic.</source>
					<volume>71</volume>
					<issue>5</issue>
					<fpage>437</fpage>
					<lpage>443</lpage>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B19">
				<mixed-citation>Martí E., Variatza E. y Balcázar J.L. (2014). The role of aquatic
					ecosystems as reservoirs of antibiotic resistance. Trends Microbiol. 22 (1),
					36-41. https://doi.org/10.1016/j.tim.2013.11.001</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Martí</surname>
							<given-names>E.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Variatza</surname>
							<given-names>E.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Balcázar</surname>
							<given-names>J.L.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2014</year>
					<article-title>The role of aquatic ecosystems as reservoirs of antibiotic
						resistance</article-title>
					<source>Trends Microbiol.</source>
					<volume>22</volume>
					<issue>1</issue>
					<fpage>36</fpage>
					<lpage>41</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1016/j.tim.2013.11.001</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B20">
				<mixed-citation>Mezrioui N. y Baleux B. (1994). Resistance patterns of <italic>E.
						coli</italic> strains isolated from domestic sewage before and after
					treatment in both aerobic lagoon and activated sludge. Water Res. 28 (11),
					2399-2406. https://doi.org/10.1016/0043-1354(94)90056-6</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Mezrioui</surname>
							<given-names>N.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Baleux</surname>
							<given-names>B.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>1994</year>
					<article-title>Resistance patterns of E. coli strains isolated from domestic
						sewage before and after treatment in both aerobic lagoon and activated
						sludge</article-title>
					<source>Water Res.</source>
					<volume>28</volume>
					<issue>11</issue>
					<fpage>2399</fpage>
					<lpage>2406</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1016/0043-1354(94)90056-6</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B21">
				<mixed-citation>Morín N., Santiago A.E., Ernst R.K., Guillot S.J. y Nataro J.P.
					(2013). Characterization of the AggR regulon in enteroaggregative
						<italic>Escherichia coli</italic>. Infect. Immun. 81 (1), 122-132.
					https://doi.org/10.1128/IAI.00676-12</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Morín</surname>
							<given-names>N.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Santiago</surname>
							<given-names>A.E.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Ernst</surname>
							<given-names>R.K.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Guillot</surname>
							<given-names>S.J.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Nataro</surname>
							<given-names>J.P.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2013</year>
					<article-title>Characterization of the AggR regulon in enteroaggregative
						Escherichia coli</article-title>
					<source>Infect. Immun.</source>
					<volume>81</volume>
					<issue>1</issue>
					<fpage>122</fpage>
					<lpage>132</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1128/IAI.00676-12</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B22">
				<mixed-citation>Nataro J.P. y Kaper J.B. (1998). Diarrheagenic <italic>Escherichia
						coli</italic>. <italic>Clin.</italic> Microbiol. Rev. 11 (1), 142-201.
					https://doi.org/10.1128/CMR.11.1.142</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Nataro</surname>
							<given-names>J.P.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Kaper</surname>
							<given-names>J.B.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>1998</year>
					<article-title>Diarrheagenic Escherichia coli. Clin.</article-title>
					<source>Microbiol. Rev.</source>
					<volume>11</volume>
					<issue>1</issue>
					<fpage>142</fpage>
					<lpage>201</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1128/CMR.11.1.142</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B23">
				<mixed-citation>Novo A., André S, Viana P., Nunes O.C. y Manaia C.M. (2013).
					Antibiotic resistance, antimicrobial residue and bacterial community composition
					in urban wastewater. Water Res. 47, 1875-1887.
					https://doi.org/10.1016/j.watres.2013.01.010</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Novo</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>André</surname>
							<given-names>S</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Viana</surname>
							<given-names>P.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Nunes</surname>
							<given-names>O.C.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Manaia</surname>
							<given-names>C.M.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2013</year>
					<article-title>Antibiotic resistance, antimicrobial residue and bacterial
						community composition in urban wastewater</article-title>
					<source>Water Res.</source>
					<volume>47</volume>
					<fpage>1875</fpage>
					<lpage>1887</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1016/j.watres.2013.01.010</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B24">
				<mixed-citation>Okoh A.I., Odjadjare E.E., Igbinosa E.O. y Osode A.N. (2007).
					Wastewater treatment plants as a source of microbial pathogens in receiving
					watersheds. Afr. J. Biotechnol. 6 (25), 2932-2944.
					https://doi.org/10.5897/AJB2007.000-2462</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Okoh</surname>
							<given-names>A.I.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Odjadjare</surname>
							<given-names>E.E.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Igbinosa</surname>
							<given-names>E.O.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Osode</surname>
							<given-names>A.N.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2007</year>
					<article-title>Wastewater treatment plants as a source of microbial pathogens in
						receiving watersheds</article-title>
					<source>Afr. J. Biotechnol.</source>
					<volume>6</volume>
					<issue>25</issue>
					<fpage>2932</fpage>
					<lpage>2944</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.5897/AJB2007.000-2462</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B25">
				<mixed-citation>Omar K.B. y Barnard T.G. (2010). The occurrence of pathogenic
						<italic>Escherichia coli</italic> in South African wastewater treatment
					plants as detected by multiplex PCR. Water SA, 36 (2), 172-176.
					https://doi.org/10.4314/wsa.v36i2.183725</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Omar</surname>
							<given-names>K.B.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Barnard</surname>
							<given-names>T.G.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2010</year>
					<article-title>The occurrence of pathogenic Escherichia coli in South African
						wastewater treatment plants as detected by multiplex PCR</article-title>
					<source>Water SA</source>
					<volume>36</volume>
					<issue>2</issue>
					<fpage>172</fpage>
					<lpage>176</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.4314/wsa.v36i2.183725</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B26">
				<mixed-citation>Reinthaler F.F., Posch J., Feierl G., Wüst G., Haas D., Ruckenbauer
					G. y Marth E. (2003). Antibiotic resistance of <italic>E. coli</italic> in
					sewage and sludge. Water Res. 37 (8), 1685-1690.
					https://doi.org/10.1016/S0043-1354(02)00569-9</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Reinthaler</surname>
							<given-names>F.F.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Posch</surname>
							<given-names>J.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Feierl</surname>
							<given-names>G.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Wüst</surname>
							<given-names>G.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Haas</surname>
							<given-names>D.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Ruckenbauer</surname>
							<given-names>G.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Marth</surname>
							<given-names>E.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2003</year>
					<article-title>Antibiotic resistance of E. coli in sewage and
						sludge</article-title>
					<source>Water Res.</source>
					<volume>37</volume>
					<issue>8</issue>
					<fpage>1685</fpage>
					<lpage>1690</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1016/S0043-1354(02)00569-9</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B27">
				<mixed-citation>Riveros M., Barletta F., Cabello M., Durand D., Mercado E.H.,
					Contreras C., Rivera F.P., Mosquito S., Lluque A. y Ochoa T.J. (2011). Adhesion
					patterns in diffusely adherent <italic>Escherichia coli</italic> (DAEC) strains
					isolated from children with and without diarrea. Revista Peruana de Medicina
					Experimental y Salud Pública 28 (1):21-8.
					https://doi.org/10.1590/s1726-46342011000100004</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Riveros</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Barletta</surname>
							<given-names>F.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Cabello</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Durand</surname>
							<given-names>D.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Mercado</surname>
							<given-names>E.H.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Contreras</surname>
							<given-names>C.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Rivera</surname>
							<given-names>F.P.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Mosquito</surname>
							<given-names>S.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Lluque</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Ochoa</surname>
							<given-names>T.J.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2011</year>
					<article-title>Adhesion patterns in diffusely adherent Escherichia coli (DAEC)
						strains isolated from children with and without diarrea</article-title>
					<source>Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública</source>
					<volume>28</volume>
					<issue>1</issue>
					<fpage>21</fpage>
					<lpage>28</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi"
						>https://doi.org/10.1590/s1726-46342011000100004</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B28">
				<mixed-citation>Rodríguez C., Lang L., Wang A., Altendorf K., García F. y Lipski A.
					(2006). Lettuce for human consumption collected in Costa Rica contains complex
					communities of culturable oxytetracycline-and gentamicin-resistant bacteria.
					Appl. Environ. Microb. 72 (9), 5870-5876.
					https://doi.org/10.1128/AEM.00963-06</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Rodríguez</surname>
							<given-names>C.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Lang</surname>
							<given-names>L.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Wang</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Altendorf</surname>
							<given-names>K.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>García</surname>
							<given-names>F.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Lipski</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2006</year>
					<article-title>Lettuce for human consumption collected in Costa Rica contains
						complex communities of culturable oxytetracycline-and gentamicin-resistant
						bacteria</article-title>
					<source>Appl. Environ. Microb.</source>
					<volume>72</volume>
					<issue>9</issue>
					<fpage>5870</fpage>
					<lpage>5876</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1128/AEM.00963-06</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B29">
				<mixed-citation>Rojas-Higuera N., Sánchez-Garibello A., Matiz-Villamil A.,
					Salcedo-Reyes J.C., Carrascal-Camacho A.K. y Pedroza-Rodríguez A.M. (2010).
					Evaluación de tres métodos para la inactivación de coliformes y
						<italic>Escherichia coli</italic> presentes en agua residual doméstica,
					empleada para riego. Universitas Scientiarum 15 (2): 139-149.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Rojas-Higuera</surname>
							<given-names>N.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Sánchez-Garibello</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Matiz-Villamil</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Salcedo-Reyes</surname>
							<given-names>J.C.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Carrascal-Camacho</surname>
							<given-names>A.K.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Pedroza-Rodríguez</surname>
							<given-names>A.M.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2010</year>
					<article-title>Evaluación de tres métodos para la inactivación de coliformes y
						Escherichia coli presentes en agua residual doméstica, empleada para
						riego</article-title>
					<source>Universitas Scientiarum</source>
					<volume>15</volume>
					<issue>2</issue>
					<fpage>139</fpage>
					<lpage>149</lpage>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B30">
				<mixed-citation>SE (2001a). Norma Mexicana NMX-AA-028-SCFI-2001. Análisis de
					agua-Determinación de la demanda bioquímica de oxígeno en aguas naturales,
					residuales (DBO<sub>5</sub>) y residuales tratadas.-Método de prueba. Dirección
					General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de la Federación, 17
					de abril.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2001</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-028-SCFI-2001. Análisis de
						agua-Determinación de la demanda bioquímica de oxígeno en aguas naturales,
						residuales (DBO5) y residuales tratadas.-Método de prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 17 de abril</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B31">
				<mixed-citation>SE (2001b). Norma Mexicana NMX-AA-029-SCFI-2001 Análisis de
					aguas-Determinación de fósforo total en aguas naturales, residuales y residuales
					tratadas.- Método de prueba. Dirección General de Normas, Secretaría de
					Economía. Diario Oficial de la Federación, 17 de abril.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2001</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-029-SCFI-2001 Análisis de
						aguas-Determinación de fósforo total en aguas naturales, residuales y
						residuales tratadas.- Método de prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 17 de abril</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B32">
				<mixed-citation>SE (2001c). Norma Mexicana NMX-AA-036-SCFI-2001. Análisis de
					agua-Determinación de acidez y alcalinidad en aguas naturales, residuales y
					residuales tratadas.-Método de prueba. Dirección General de Normas, Secretaría
					de Economía. Diario Oficial de la Federación, 1 de agosto.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2001</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-036-SCFI-2001. Análisis de
						agua-Determinación de acidez y alcalinidad en aguas naturales, residuales y
						residuales tratadas.-Método de prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 1 de agosto</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B33">
				<mixed-citation>SE (2001d). Norma Mexicana NMX-AA-073-SCFI-2001. Análisis de
					agua-Determinación de cloruros totales en aguas naturales, residuales y
					residuales tratadas.-Método de prueba Dirección General de Normas, Secretaría de
					Economía. Diario Oficial de la Federación, 13 de agosto.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author"/>
					<year>2001</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-073-SCFI-2001. Análisis de
						agua-Determinación de cloruros totales en aguas naturales, residuales y
						residuales tratadas</article-title>
					<source>Método de prueba Dirección General de Normas, Secretaría de Economía.
						Diario Oficial de la Federación, 13 de agosto</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B34">
				<mixed-citation>SE (2001e). Norma Mexicana NMX-AA-072-SCFI-2001 Análisis de
					agua-Determinación de dureza total en aguas naturales, residuales y residuales
					tratadas.-Método de prueba. Dirección General de Normas, Secretaría de Economía.
					Diario Oficial de la Federación, 13 de agosto.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2001</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-072-SCFI-2001 Análisis de
						agua-Determinación de dureza total en aguas naturales, residuales y
						residuales tratadas.-Método de prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 13 de agosto</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B35">
				<mixed-citation>SE (2001f). Norma Mexicana NMX-AA-038-SCFI-2001. Análisis de
					agua-Determinación de turbiedad en aguas naturales, residuales y residuales
					tratadas.- Método de pruebaDirección General de Normas, Secretaría de Economía.
					Diario Oficial de la Federación, 1 de agosto .</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2001</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-038-SCFI-2001. Análisis de
						agua-Determinación de turbiedad en aguas naturales, residuales y residuales
						tratadas.- Método de prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 1 de agosto</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B36">
				<mixed-citation>SE (2010). Norma Mexicana NMX-AA-026-SCFI-2010 Análisis de
					agua-Medición de nitrógeno total kjeldahl en aguas naturales, residuales y
					residuales tratadas.-Método de prueba. Dirección General de Normas, Secretaría
					de Economía. Diario Oficial de la Federación, 3 de marzo.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2010</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-026-SCFI-2010 Análisis de agua-Medición de
						nitrógeno total kjeldahl en aguas naturales, residuales y residuales
						tratadas.-Método de prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 3 de marzo</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B37">
				<mixed-citation>SE (2012). Norma Mexicana NMX-AA-030/1-SCFI-2012 Análisis de
					agua-Medición de la demanda química de oxígeno en aguas naturales, residuales y
					residuales tratadas.-Método de prueba. Parte 1- Método de reflujo abierto.
					Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de la
					Federación, 21 de mayo.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2012</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-030/1-SCFI-2012 Análisis de agua-Medición
						de la demanda química de oxígeno en aguas naturales, residuales y residuales
						tratadas.-Método de prueba. Parte 1- Método de reflujo
						abierto</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 21 de mayo</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B38">
				<mixed-citation>SE (2013a). Norma Mexicana NMX-AA-007-SCFI-2013 Análisis de agua-
					Medición de la temperatura en aguas naturales, residuales y residuales
					tratadas-Método de prueba. Dirección General de Normas, Secretaría de Economía.
					Diario Oficial de la Federación, 23 de enero.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2013</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-007-SCFI-2013 Análisis de agua- Medición de
						la temperatura en aguas naturales, residuales y residuales tratadas-Método
						de prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 23 de enero</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B39">
				<mixed-citation>SE (2013b). Norma Mexicana NMX-AA-004-SCFI-2013. Análisis de
					agua-Medición de sólidos sedimentables en aguas naturales, residuales y
					residuales tratadas.-Método de prueba. Dirección General de Normas, Secretaría
					de Economía. Diario Oficial de la Federación, 13 de noviembre.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2013</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-004-SCFI-2013. Análisis de agua-Medición de
						sólidos sedimentables en aguas naturales, residuales y residuales
						tratadas.-Método de prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 13 de noviembre</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B40">
				<mixed-citation>SE (2013c). Norma Mexicana NMX-AA-005-SCFI-2013. Análisis de
					agua-Medición de grasas y aceites recuperables en aguas naturales, residuales y
					residuales tratadas-Método de prueba. Dirección General de Normas, Secretaría de
					Economía. Diario Oficial de la Federación, 11 de abril.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2013</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-005-SCFI-2013. Análisis de agua-Medición de
						grasas y aceites recuperables en aguas naturales, residuales y residuales
						tratadas-Método de prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 11 de abril</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B41">
				<mixed-citation>SE (2014). Norma Mexicana NMX-AA-074-2014 Análisis de agua-Medición
					del ión sulfato en aguas naturales, residuales y residuales tratadas-Método de
					prueba. Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
					la Federación, 25 de agosto.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2014</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-074-2014 Análisis de agua-Medición del ión
						sulfato en aguas naturales, residuales y residuales tratadas-Método de
						prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 25 de agosto</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B42">
				<mixed-citation>SE (2015a). Norma Mexicana NMX-AA-042-SCFI-2015. Enumeración de
					Organismos Coliformes Totales, organismos coliformes Fecales (termotolerantes) y
						<italic>Escherichia coli</italic>-Método del número más probable en tubos
					múltiples. Secretaría de Economía. Diario Oficial de la Federación, 18 de
					abril.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2015</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-042-SCFI-2015. Enumeración de Organismos
						Coliformes Totales, organismos coliformes Fecales (termotolerantes) y
						Escherichia coli-Método del número más probable en tubos
						múltiples</article-title>
					<source>Secretaría de Economía. Diario Oficial de la Federación, 18 de
						abril</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B43">
				<mixed-citation>SE (2015b). Norma Mexicana NMX-AA-034-SCFI-2015 Análisis de
					agua-Medición de sólidos y sales disueltas en aguas naturales, residuales y
					residuales tratadas-Método de prueba. Dirección General de Normas, Secretaría de
					Economía. Diario Oficial de la Federación, 18 de abril.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2015</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-034-SCFI-2015 Análisis de agua-Medición de
						sólidos y sales disueltas en aguas naturales, residuales y residuales
						tratadas-Método de prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 18 de abril</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B44">
				<mixed-citation>SE (2016a). Norma Mexicana NMX-AA-008-SCFI-2016. Análisis de
					agua-Medición de pH en aguas naturales, residuales y residuales tratadas-Método
					de prueba. Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial
					de la Federación, 25 de agosto de 2016.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2016</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-008-SCFI-2016. Análisis de agua-Medición de
						pH en aguas naturales, residuales y residuales tratadas-Método de
						prueba</article-title>
					<source>Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de
						la Federación, 25 de agosto de 2016</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B45">
				<mixed-citation>SE (2016b). Norma Mexicana NMX-AA-093-SCFI-2000. Análisis de
					agua-Determinación de la conductividad electrolítica.-Método de prueba.
					Dirección General de Normas, Secretaría de Economía. Diario Oficial de la
					Federación, 25 de agosto.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SE</collab>
					</person-group>
					<year>2016</year>
					<article-title>Norma Mexicana NMX-AA-093-SCFI-2000. Análisis de
						agua-Determinación de la conductividad electrolítica.-Método de prueba.
						Dirección General de Normas, Secretaría de Economía</article-title>
					<source>Diario Oficial de la Federación, 25 de agosto</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B46">
				<mixed-citation>SEMARNAT (1996a). Norma Oficial Mexicana NOM-001-SEMARNAT-1996. Que
					establece los límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de
					aguas residuales en aguas y bienes nacionales. Secretaría de Medio Ambiente y
					Recursos Naturales. Diario Oficial de la Federación, 3 de
					junio.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SEMARNAT</collab>
					</person-group>
					<year>1996</year>
					<article-title>Norma Oficial Mexicana NOM-001-SEMARNAT-1996. Que establece los
						límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas
						residuales en aguas y bienes nacionales. Secretaría de Medio Ambiente y
						Recursos Naturales</article-title>
					<source>Diario Oficial de la Federación, 3 de junio</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B47">
				<mixed-citation>SEMARNAT (1996b). Norma Oficial Mexicana NOM-002-SEMARNAT-1996. Que
					establece los límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de
					aguas residuales a los sistemas de alcantarillado urbano o municipal. Secretaría
					de Medio Ambiente y Recursos Naturales. Diario Oficial de la Federación, 3 de
					junio.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SEMARNAT</collab>
					</person-group>
					<year>1996</year>
					<article-title>Norma Oficial Mexicana NOM-002-SEMARNAT-1996. Que establece los
						límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas
						residuales a los sistemas de alcantarillado urbano o municipal. Secretaría
						de Medio Ambiente y Recursos Naturales</article-title>
					<source>Diario Oficial de la Federación, 3 de junio</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B48">
				<mixed-citation>SEMARNAT (1997). Norma Oficial Mexicana NOM-003-SEMARNAT-1997. Que
					establece los límites máximos permisibles de contaminantes para las aguas
					residuales tratadas que se reúsen en servicios al público. Secretaría de Medio
					Ambiente y Recursos Naturales. Diario Oficial de la Federación, 21 de
					septiembre.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="legal-doc">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>SEMARNAT</collab>
					</person-group>
					<year>1997</year>
					<article-title>Norma Oficial Mexicana NOM-003-SEMARNAT-1997. Que establece los
						límites máximos permisibles de contaminantes para las aguas residuales
						tratadas que se reúsen en servicios al público. Secretaría de Medio Ambiente
						y Recursos Naturales</article-title>
					<source>Diario Oficial de la Federación, 21 de septiembre</source>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B49">
				<mixed-citation>Shaheen H.I., Khalil S.B., Rao M.R., Elyazeed R.A., Wierzba T.F.,
					Peruski L.F., Putman S., Navarro A., Morsy B., Cravioto A., Clemens J.,
					Svennerholm A. y Savarino S. (2004). Phenotypic profiles of enterotoxigenic
						<italic>Escherichia coli</italic> associated with early childhood diarrhea
					in rural Egypt. J. Clin. Microbiol. 42 (12), 5588-5595.
					https://doi.org/10.1128/JCM.42.12.5588-5595.2004</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Shaheen</surname>
							<given-names>H.I.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Khalil</surname>
							<given-names>S.B.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Rao</surname>
							<given-names>M.R.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Elyazeed</surname>
							<given-names>R.A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Wierzba</surname>
							<given-names>T.F.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Peruski</surname>
							<given-names>L.F.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Putman</surname>
							<given-names>S.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Navarro</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Morsy</surname>
							<given-names>B.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Cravioto</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Clemens</surname>
							<given-names>J.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Svennerholm</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Savarino</surname>
							<given-names>S.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2004</year>
					<article-title>Phenotypic profiles of enterotoxigenic Escherichia coli
						associated with early childhood diarrhea in rural Egypt</article-title>
					<source>J. Clin. Microbiol.</source>
					<volume>42</volume>
					<issue>12</issue>
					<fpage>5588</fpage>
					<lpage>5595</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi"
						>https://doi.org/10.1128/JCM.42.12.5588-5595.2004</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B50">
				<mixed-citation>Sidhu J.P. y Toze S.G. (2009). Human pathogens and their indicators
					in biosolids: A literature review. Environ Int. 35 (1), 187-201.
					https://doi.org/10.1016/j.envint.2008.07.006</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Sidhu</surname>
							<given-names>J.P.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Toze</surname>
							<given-names>S.G.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2009</year>
					<article-title>Human pathogens and their indicators in biosolids: A literature
						review</article-title>
					<source>Environ Int.</source>
					<volume>35</volume>
					<issue>1</issue>
					<fpage>187</fpage>
					<lpage>201</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1016/j.envint.2008.07.006</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B51">
				<mixed-citation>Ud-Din A. y Wahid S. (2014). Relationship among <italic>Shigella
						spp</italic>. and enteroinvasive <italic>Escherichia coli</italic> (EIEC)
					and their differentiation. Braz. J. Microbiol. 45 (4), 1131-1138.
					https://doi.org/10.1590/S1517-83822014000400002</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Ud-Din</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Wahid</surname>
							<given-names>S.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2014</year>
					<article-title>Relationship among Shigella spp. and enteroinvasive Escherichia
						coli (EIEC) and their differentiation</article-title>
					<source>Braz. J. Microbiol.</source>
					<volume>45</volume>
					<issue>4</issue>
					<fpage>1131</fpage>
					<lpage>1138</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi"
						>https://doi.org/10.1590/S1517-83822014000400002</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B52">
				<mixed-citation>US-EPA (2005). Method 1623. <italic>Cryptosporidium</italic> and
						<italic>Giardia</italic> in water by filtration/IMS/IFA. Manual. Office of
					Ground Water and Drinking Water, United States Environmental Protection Agency.
					Cincinnati, OH, EUA, 68 pp.</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="report">
					<person-group person-group-type="author">
						<collab>US-EPA</collab>
					</person-group>
					<year>2005</year>
					<source>Method 1623. <italic>Cryptosporidium</italic> and
							<italic>Giardia</italic> in water by filtration/IMS/IFA. Manual</source>
					<publisher-name>Office of Ground Water and Drinking Water, United States
						Environmental Protection Agency</publisher-name>
					<publisher-loc>Cincinnati, OH, EUA</publisher-loc>
					<fpage>68</fpage>
					<lpage>68</lpage>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B53">
				<mixed-citation>Vidal M., Carreño M., Vidal R., Arellano C., Solari V. y Prado V.
					(2002). Evaluación de técnicas moleculares e inmunoenzimáticas para la detección
					de E coli enterohemorrágico en brotes de toxiinfecciones alimentarias. Rev. Med.
					Chile 130 (6), 603-609.
					https://doi.org/10.4067/S0034-98872002000600001</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Vidal</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Carreño</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Vidal</surname>
							<given-names>R.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Arellano</surname>
							<given-names>C.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Solari</surname>
							<given-names>V.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Prado</surname>
							<given-names>V.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2002</year>
					<article-title>Evaluación de técnicas moleculares e inmunoenzimáticas para la
						detección de E coli enterohemorrágico en brotes de toxiinfecciones
						alimentarias</article-title>
					<source>Rev. Med. Chile</source>
					<volume>130</volume>
					<issue>6</issue>
					<fpage>603</fpage>
					<lpage>609</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi"
						>https://doi.org/10.4067/S0034-98872002000600001</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B54">
				<mixed-citation>Weintraub A. (2007). Enteroaggregative <italic>Escherichia
						coli</italic>: Epidemiology, virulence and detection. J. Med. Microbiol. 56
					(1), 4-8. https://doi.org/10.1099/jmm.0.46930-0</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Weintraub</surname>
							<given-names>A.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2007</year>
					<article-title>Enteroaggregative Escherichia coli: Epidemiology, virulence and
						detection</article-title>
					<source>J. Med. Microbiol.</source>
					<volume>56</volume>
					<issue>1</issue>
					<fpage>4</fpage>
					<lpage>8</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1099/jmm.0.46930-0</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B55">
				<mixed-citation>Weiler N., Orrego M., Álvarez M. y Huber C. (2017). Detección
					molecular de <italic>Escherichia coli</italic> diarreogénicas en pacientes
					pediátricos con síndrome diarreico agudo en Paraguay. Memorias del Instituto de
					Investigaciones en Ciencias de la Salud 15 (1): 16-21.
					https://doi.org/10.18004/Mem.iics/1812-9528/2017.015(01)16-021</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Weiler</surname>
							<given-names>N.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Orrego</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Álvarez</surname>
							<given-names>M.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Huber</surname>
							<given-names>C.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2017</year>
					<article-title>Detección molecular de Escherichia coli diarreogénicas en
						pacientes pediátricos con síndrome diarreico agudo en
						Paraguay</article-title>
					<source>Memorias del Instituto de Investigaciones en Ciencias de la
						Salud</source>
					<volume>15</volume>
					<issue>1</issue>
					<fpage>16</fpage>
					<lpage>21</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi"
						>https://doi.org/10.18004/Mem.iics/1812-9528/2017.015(01)16-021</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
			<ref id="B56">
				<mixed-citation>Ye L. y Zhang T. (2011). Pathogenic bacteria in sewage treatment
					plants as revealed by pyrosequencing. Environ. Sci. Technol. 45 (17), 7173-7179.
					https://doi.org/10.1021/es201045e</mixed-citation>
				<element-citation publication-type="journal">
					<person-group person-group-type="author">
						<name>
							<surname>Ye</surname>
							<given-names>L.</given-names>
						</name>
						<name>
							<surname>Zhang</surname>
							<given-names>T.</given-names>
						</name>
					</person-group>
					<year>2011</year>
					<article-title>Pathogenic bacteria in sewage treatment plants as revealed by
						pyrosequencing</article-title>
					<source>Environ. Sci. Technol.</source>
					<volume>45</volume>
					<issue>17</issue>
					<fpage>7173</fpage>
					<lpage>7179</lpage>
					<pub-id pub-id-type="doi">https://doi.org/10.1021/es201045e</pub-id>
				</element-citation>
			</ref>
		</ref-list>
	</back>
</article>
