Para que el resultado de un análisis químico esté completo, debe incluirse la incertidumbre de la medición del ensayo. En muchos casos, la interpretación de un resultado puede resultar sumamente difícil, a menos que vaya acompañado de su incertidumbre asociada.¹

La guía para la expresión de la incertidumbre en la medición, define la incertidumbre como parámetro asociado al resultado de una medición, que caracteriza la dispersión de los valores que pudieran ser razonablemente atribuidos al mensurando.²

Todo proceso de medida tiene como fin obtener información sobre el mensurando, con objeto de evaluar su conformidad con las especificaciones, realizar comparaciones o tomar otras decisiones. En cualquier caso, el resultado de la medida es tan importante como la calidad de dicha medida. La calidad de una medida se cuantifica mediante la evaluación de la incertidumbre de dicha medida.

La evaluación de la incertidumbre de la medición en análisis químico es una actividad fundamental, que realiza cualquier laboratorio que desee emitir resultados confiables.³

La estimación de la incertidumbre de la medición, es un proceso complejo (más no complicado) que requiere del conocimiento detallado del método analítico. Así mismo, se debe disponer de información estadística de los datos que se obtienen en forma rutinaria, por lo cual se recomienda realizar previamente estudios de validación de métodos, materiales y equipos.

Calcular la incertidumbre de un ensayo, además de ser un proceso imprescindible para mostrar calidad metrológica (en algunos sectores es obligatorio), sirve para identificar los puntos más críticos, aquellos que contribuyen en mayor cuantía a la incertidumbre del ensayo, lo que permite tomar acciones correctivas y preventivas para obtener resultados analíticos más confiables.⁴

En el Centro de Bioactivos Químicos (CBQ) de la Universidad Central “Marta Abreu” de Las Villas, se produce y comercializa nacional e internacionalmente el Vitrofural^®. Se encuentra asentado en el Registro Central de Plaguicidas (No. 013/99, Tomo 3, Folio 249, Ministerio de la Agricultura, La Habana, Cuba) desde el año 1999, como inhibidor de la contaminación microbiana de los medios de cultivos utilizados para la micropropagación de plantas sin el empleo de la autoclave. Este producto cuenta con una marca registrada en Cuba para su comercialización en las clases 1 y 5, según la Resolución 1224/2012 de la Oficina Cubana de la Propiedad Industrial, desde el año 2012, y cuenta, además, con la Norma Cubana NC 1090: 2015 “Inhibidor de la contaminación microbiana en medios de cultivo para la producción de vitroplantas (Vitrofural( Requisitos y métodos de ensayo”.⁵

Todos los métodos de ensayo utilizados para el control de la calidad de los lotes de Vitrofural fueron desarrollados en el Laboratorio de Control de la Calidad del CBQ. Dentro de ellos, la determinación del contenido de furvina (1-(5-bromofur-2-il)-2-bromo-2-nitroeteno, también conocido como G-1), ingrediente activo con acción antibacteriana y antifúngica ^6-8 en el Vitrofural, por espectrofotometría ultravioleta-visible, fue validado en el año 2008.⁹

Es necesario demostrar, que este método analítico brinda resultados fiables y, por lo tanto, adecuados para el propósito previsto, lo que constituye la base para la gestión del Laboratorio de Control de la Calidad del CBQ, si quiere demostrar su competencia técnica y su capacidad para generar resultados técnicamente válidos.³

El objetivo de este trabajo es estimar la incertidumbre asociada a la medición del contenido de furvina en el Vitrofural, por espectrofotometría ultravioleta-visible.

La cristalería y el equipamiento utilizado fueron verificados y calibrados por la Oficina Territorial de Normalización (OTN). Se contó con los certificados acreditativos. Los reactivos empleados poseían la calidad requerida, según avalaron los certificados de calidad de los proveedores.

Evaluando en la ecuación (1), se obtuvo el contenido de furvina en el lote de Vitrofural estudiado.

Las incertidumbres correspondientes a las variables de entrada se determinaron como sigue:

Incertidumbre de % de pureza del MR, u _C (% P _MR ). Según las especificaciones del proveedor. Distribución rectangular:

Incertidumbre de la masa del MR, u _C (M _MR ). Según certificado de calibración de la balanza analítica, k= 2. Distribución normal:

Incertidumbre de la absorbancia promedio del MR, u _C (Absp _MR ). Según suma de las contribuciones:

Matraz de 10 mL. Información del certificado de calibración, k= 2. Distribución normal:

Calculando u _C (Absp _MR ) según (4):

En la figura 3 se muestra el comportamiento (contribuciones) de cada una de las incertidumbres combinadas que aportan a la u_C(Absp_MR).

Fig. 3

Al calcular la incertidumbre aportada por la cristalería no se tuvo en cuenta la variación de la temperatura, ya que se trabajó bajo condiciones de temperatura controlada (20 ^oC). Con respecto a la contribución de las fuentes de incertidumbre que aportan a la incertidumbre combinada de la absorbancia promedio del MR (Absp_MR), en la figura 3, se puede apreciar que las mayores contribuciones corresponden a la cristalería, matraz de 25 mL con un 53,6 % y matraz de 10 mL con un 26,8 %, de ahí la importancia de trabajar siempre con cristalería clase A, previamente calibrada por una entidad reconocida, con el fin de contribuir a la calidad de los resultados de este ensayo. El material volumétrico de la clase B se encuentra dentro del doble de los límites de error de la clase A/AS, según la NC 1063: 2015.¹⁴

La repetibilidad de las dos mediciones de la absorbancia del MR, la pipeta graduada de 1 mL y la repetibilidad instrumental del espectrofotómetro UV-VIS también contribuyen, pero de manera menos significativa, en un 8,9 %, 6,2 % y 4,3 %, respectivamente. Las repetibilidades, en ambos casos deben siempre mantenerse por debajo del coeficiente de variación obtenido durante la validación de la técnica.⁹ La pipeta utilizada, al igual que los matraces, también debe ser clase A y previamente calibrada por una entidad reconocida.

En la figura 4 se muestran las contribuciones de cada una de las variables de entrada a la incertidumbre combinada final, u _C (% F _LV ).

Fig. 4

En la figura 4 se observa que el 89,4 % de la contribución a la incertidumbre combinada final del contenido de furvina en el Vitrofural, está dado por la absorbancia promedio del MR. La pureza del MR contribuye en un 9,8 %, y la masa del MR prácticamente no contribuye con incertidumbre (0,8 %).

Después de analizar las figuras 3 y 4, se resume que las mayores contribuciones están dadas por la cristalería utilizada, una vez más se corrobora la necesidad de la correcta práctica de laboratorio, que incluye la adecuada selección de la cristalería y, particularmente, la calibración y/o verificación de la misma. También es fundamental el buen uso de la cristalería, para lo que se requiere de analistas con elevado nivel de confiabilidad.^15,16

Teniendo en cuenta la figura 3, aplicando las reglas de propagación, y sustituyendo en el modelo matemático, se obtiene u _C (%F _LV ).

La incertidumbre expandida, calculada según la ecuación 2, es de 0,12 %, lo que representa un valor experimental aceptable en la determinación de furvina en el Vitrofural.

Finalmente, los resultados obtenidos para el lote 20-4-2 de Vitrofural, para k = 2 con un 95 % de confianza, fueron:

En la figura 5 se representan los resultados obtenidos, teniendo en cuenta los límites de especificación de calidad establecidos para la técnica.

Fig. 5

Según establece la EURACEM, el cumplimiento de un requisito a menudo requiere demostrar que un mensurando está entre unos límites concretos. La incertidumbre de medida tiene claras implicaciones para la interpretación de los resultados analíticos en este contexto. La incertidumbre en el resultado analítico debe tenerse en cuenta a la hora de evaluar el cumplimiento.¹¹

En el caso estudiado, el contenido de furvina en el Vitrofural cumple con los requisitos establecidos, se encuentra entre 29,00 % y 31,00 %, y dentro de esos límites se encuentra incluida la incertidumbre.

El contenido de furvina en el lote 20-4-2 de Vitrofural es: 30,21 % ± 0,12 %, k = 2.

Como resultado de este estudio se obtuvo el modelo matemático, y se identificaron las fuentes de incertidumbre en la medición del contenido de furvina en el Vitrofural. Con ellas se estimó la incertidumbre estándar combinada (u_C(% F_LV) = 0,06 %) y la incertidumbre expandida (U(% F_LV) = 0,12 %). Se demostró que las fuentes de incertidumbre que más contribuyen en este análisis son la cristalería empleada, lo cual corrobora la importancia de una adecuada selección y utilización de la cristalería, y particularmente, la calibración y/o verificación de la misma. Se determinó el contenido de furvina en un lote de Vitrofural, el resultado final fue 30,21 ± 0,12 %, k = 2.