1. INTRODUCCIÓN

Los recursos vegetales han sido partícipes fundamentales en el desarrollo de varias culturas en el mundo. Las sustancias obtenidas de la naturaleza, mediados por el conocimiento ancestral se materializan en fitoterápicos utilizados por la medicina contemporánea para el tratamiento de diversas afecciones del ser humano, como alternativa a medicamentos de origen sintético. Aspidosperma es un género ampliamente conocido por su riqueza en metabolitos biológicamente activos, entre los que predominan los alcaloides de tipo indol, aunque también han sido reportados flavonoides, triterpenos, ácidos orgánicos y saponinas de ciertas especies (Nishibe et al., 2001; Oliveira et al., 2009; de Almeida et al., 2019). Sus usos en la medicina tradicional se encuentran documentados como antimalárico, para el tratamiento de reumatismo y fiebre (de Almeida et al., 2019), como abortivo, depurador de la sangre y anticólico (Degen Naumann y Mereles, 1997). En Paraguay, la corteza de Aspidosperma quebracho-blanco puede ser adquirida en tiendas de herbolaria situadas en mercados populares. La misma es consumida en formas de decocción, infusión o mate ya que se le atribuye variadas propiedades para el alivio de dolores estomacales, como diurético, en el tratamiento de intoxicaciones, asma, tos, úlcera de estómago, hemorroides, parásitos intestinales, lavado de heridas y úlceras, entre otros (Degen Naumann y Mereles, 1997; Peña-Chocarro et al., 2006; Friesen Ratzlaff, 2017). La corteza contiene colorante amarillo y varios principios medicinales, además de ser rica en taninos así como las hojas (Lorenzi, 2013). Mientras que en la medicina moderna se prescriben medicamentos, preparados a partir de la corteza, para el tratamiento de patologías como la disfunción eréctil masculina (Sperling et al., 2002). Extractos obtenidos de ciertas especies de Aspidosperma demostraron, en ensayos in vitro, mecanismos antitumorales sobre células de cáncer humano (Stiborová et al., 2011), actividad antiplasmodial (Mitaine-Offer et al., 2002) y leishmanicida frente a promastigotes de Leishmania (L.) amazonensis (Tanaka et al., 2007). El extracto acuoso de partes aéreas de quebracho-blanco demostró in vitro un efecto protector sobre células murinas expuestas a un agroquímico de uso frecuente (Scotta et al., 2017). El género se distribuye en varias zonas del continente americano, desde México hasta la Argentina (Bernardi, 1984). Existen 11 especies registradas para el Paraguay, entre ellas se encuentran especies de valor económico elevado y de gran importancia ecológica, como Aspidosperma polyneuron Müll. Arg. cuya madera es dura y pesada pudiendo utilizarse en construcciones, muebles y aplicaciones navales, entre otras (Ortega Torres et al., 1989) siendo su hábitat el Bosque Húmedo de la región Oriental (Pérez de Molas, 2016) y Aspidosperma quebracho-blanco Schltdl, cuya madera es utilizada en la fabricación de carbón y tableros (Sanabria et al., 2007; Sanabria et al., 2011) distribuyéndose en el Bosque Seco del Chaco (Pérez de Molas, 2016). Quebracho blanco es una especie característica del Chaco, puede tener una altura de 7-20 m, un diámetro de 30-85 cm (Pérez de Molas, 2021) y una densidad de 800-850 kg/m³ (López et al., 2002). El objetivo de esta investigación fue identificar los alcaloides presentes en la fracción orgánica obtenida a partir del extracto acuoso de la corteza de Aspidosperma quebracho-blanco Schltdl. colectada en una región del Chaco paraguayo empleando como método de cromatografía gaseosa acoplada a espectrómetro de masas GC - MS.

2. MATERIALES Y MÉTODOS

Colecta del vegetal

El individuo fue identificado in situ como Aspidosperma quebracho-blanco Schltdl. (quebracho blanco), en el Distrito de Campo Aceval, Departamento de Presidente Hayes, Región Occidental del Paraguay, con coordenadas 23° 10’ 19,8” S 59° 51’ 20,2” W (Figura 1). Fue recolectada una porción de corteza de éste, evitando dañar al ejemplar.

Preparación del extracto crudo de la corteza de quebracho blanco y su fracción orgánica

La muestra fue secada a temperatura ambiente, bajo sombra y buena circulación de aire. Posteriormente, fue triturada empleando un molino eléctrico hasta obtener un polvo fino, con el propósito de aumentar la superficie de contacto de la muestra con el solvente de extracción. En una balanza de 0,1 g de precisión se pesó 200 g de polvo de corteza que fue mezclada con 250 ml de agua destilada, tras lo cual la solución resultante se llevó a ebullición por 10 minutos a 100 °C. Finalizado el tiempo, la solución fue enfriada a temperatura ambiente y filtrada utilizando algodón comercial como primer filtro, posteriormente se realizó un segundo filtrado empleando papel de filtro cualitativo. Finalmente se obtuvo 50 ml de extracto acuoso de la corteza de quebracho blanco. Una porción de ésta fue reservada para su evaluación y otra fue basificada utilizando hidróxido de amonio (NH₄OH) diluido. La solución alcalina resultante fue mezclada posteriormente con 15 ml de cloroformo dentro de un embudo de decantación para su separación en fracciones, tras la agitación de la mezcla se recogió la fase orgánica. Este proceso fue repetido dos veces, hasta obtener la fase clorofórmica total, siendo ésta la fracción orgánica.

Análisis químico cualitativo preliminar

El extracto acuoso, así como la fracción orgánica fueron sometidos a pruebas siguiendo la metodología de Rondón et al. (2018). El propósito del análisis previo fue corroborar de manera primaria la presencia de metabolitos de interés en las muestras. Fue evaluada la abundancia de alcaloides utilizando los reactivos Mayer y Dragendorff, éstos provocan coloraciones específicas y/o precipitados de acuerdo a la presencia de grupos funcionales en los extractos analizados.

Análisis cromatográfico

El extracto orgánico fue sometido a un filtrado final utilizando filtro PTFE de 0,45 micras. Una alícuota de 2 ml de esta muestra fue utilizada para su análisis en un cromatógrafo de gases modelo Trace 1310 con detector TSQ900 acoplado a un espectro de masas con ionización de impacto electrónico marca Thermo Scientific, con automuestreador TriPlus RSH. El equipo se acondicionó con una columna capilar de 5 % difenil, 95 % de dimetilpolisiloxano con dimensiones 30 m x 0,25 mm x 0,25 µm. La temperatura de inyección fue 260 °C. Como gas portador se utilizó Helio 1,1 ml/min a flujo constante, la temperatura del horno se programó desde 60 °C hasta 280 °C. El tiempo de corrida fue de 54 minutos. Los componentes químicos determinados se reportan en orden de elución de la columna.

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Análisis químico cualitativo preliminar

La elección de agua como solvente inicial de extracción de sustancias de la corteza de quebracho blanco se justificó en el hecho de que este vegetal es consumido en formas de mate, decocción (Degen Naumann y Mereles, 1997; Friesen Ratzlaff, 2017) o tereré por la población. Las pruebas fitoquímicas realizadas a los extractos evaluados permitieron determinar de forma primaria la presencia de alcaloides con abundancia moderada a apreciable tanto en el extracto acuoso (EA) como en la fracción orgánica (FO) respectivamente, por lo que consideramos a estos hallazgos como una aproximación al tipo de sustancias que podrían estar siendo aprovechadas en las bebidas acuosas tradicionales mencionadas. La Tabla 1 resume los reactivos utilizados y la abundancia detectada en la muestra.

Mayer y Dragendorff son reactivos clásicos utilizados en la prospección cualitativa de alcaloides en muestras de origen vegetal. La formación de precipitados y viraje de coloración de los extractos de quebracho blanco se muestran en las Figuras 2 y 3 respectivamente.

Cromatografía gaseosa acoplada a espectrómetro de masas GC-MS

Bajo las condiciones en las cuales se realizaron los experimentos se lograron determinardiecisiete compuestos mayoritarios presentes en la fracción orgánica obtenida a partir del extracto acuoso de la corteza de Aspidosperma quebracho-blanco Schltdl. proveniente del Chaco paraguayo, utilizando cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas. Las estructuras químicas de estos constituyentes como sus correspondientes espectros de masas fueron identificados mediante el contraste de éstos con los datos contenidos en la biblioteca de referencia de espectros de masas National Institute of Standards and Technology - NIST con que cuenta el equipo utilizado para los análisis. La Tabla 2 presenta el resumen de moléculas con sus correspondientes tiempos de retención.

Por tipo de alcaloide, la muestra analizada se halló representada por 64,7 % indol, 23 % de indol/quinolicidínico, 5,9 % de quinileínicos y quinilidínicos respectivamente. Si bien la diversidad química del género es variada, los alcaloides de tipo indol son característicos de Aspidosperma, los hallazgos reportados en este estudio fitoquímico de la corteza de A. quebracho-blanco concuerdan con la literatura disponible sobre el género y sus especies y confirman que estos metabolitos son marcadores específicos presentes en el vegetal (Nishibe et al., 2001; de Almeida et al., 2019). El hallazgo de quebrachamina y aspidospermina en este trabajo, es congruente con lo reportado en Aspidosperma nitidum siendo ambos alcaloides los más representativos del género (Oliveira et al., 2009). Por medio de ensayos biológicos, determinados alcaloides aislados de quebracho blanco han demostrado ser inhibidores de contracciones musculares de diversos animales, analgésicos e hipotensores, sumado al conocimiento autóctono de poblaciones que permite utilizarlo como antifebril, en el tratamiento de enfermedades respiratorias y como principio afrodisiaco (Pereira et al., 2007). Las aplicaciones se ven asociadas de acuerdo a los tipos de alcaloides que se encuentren en el vegetal así como el género del cual fueron extraídos (Mitaine-Offer et al., 2002; Oliveira et al., 2009) de ahí la importancia e interés de la apropiada caracterización taxonómica como química del árbol. Para el caso de la especie estudiada en este trabajo, es de interés iniciar pruebas sobre patógenos específicos de manera a evaluar el alcance de la potencial actividad biológica que pueda presentar el extracto de quebracho blanco o sus fracciones. El hallazgo de neprotina y quinidina en la muestra resulta novedoso. La neprotina, también conocida como jatrorrizina, es un alcaloide tipo protoberberina con actividad antifúngica, antiinflamatoria y antibacteriana, entre otros, que se encuentra presente en vegetales de las especies Enantia chlorantha (Annonaceae) y Mahonia aquifolium (Berberidaceae) (Kuete, 2014). La quinidina ha sido utilizada en la medicina cardiovascular como agente antiarrítmico, pruebas demostraron que el alcaloide es superior en actividad a su isómero óptico quinina como antipalúdico, llegando a utilizarse como reemplazo en el tratamiento de Plasmodium falciparum (Menezes et al., 2001). Quinidina es un alcaloide que se encuentra en hojas de Cinchona pubescens y Ladenbergia oblongifolia, especies también utilizadas en el tratamiento de la malaria (Remuzgo et al., 2020).

4. CONCLUSIÓN

En Paraguay, determinados sectores de la población atribuyen propiedades medicinales al quebracho blanco. A pesar de ello, el estudio quimiotaxonómico del género Aspidosperma es incipiente, motivo por el cual se destaca la relevancia de los hallazgos descriptos en este trabajo sobre A. quebracho-blanco contribuyendo al conocimiento fitoquímico del mismo. El reporte de alcaloides de tipo indol en el extracto de la corteza del vegetal concuerda con diversas investigaciones que afirman que dichos metabolitos secundarios son marcadores fitoquímicos característicos del género. El conocimiento de los alcaloides presentes en la especie estudiada permitirá diseñar y desarrollar estrategias de asilamiento para los mismos. El interés sobre este tipo de compuestos de origen natural radica en las propiedades biológicas que puedan expresar frente a organismos de prueba específicos.

5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Bernardi, L. 1984. Contribución a la dendrología paraguaya 1: Apocynaceae, Bombacaceae, Euphorbiaceae, Flacourtiaceae, Mimosoideae, Caesalpinoideae, Papilionatae. Ginebra: Editions des Conservatoire et Jardin botaniques de la Ville de Genève, Missouri Botanical Garden. Boissiera, v. 35, 341 p.

de Almeida, V. L.; C. G. Silva; A. F. Silva; P. R. V. Campana; K. Foubert; J. C. D Lopes and L. Pieters. 2019. Aspidosperma species: A review of their chemistry and biological activities. Journal of Ethnopharmacology 231: 125-140. https://doi.org/10.1016/j.jep.2018.10.039

Degen Naumann, R. y H. M. F. Mereles. 1997. Las cortezas chaqueñas utilizadas en medicina popular. Rojasiana 4(1): 11-24.

Friesen Ratzlaff, V. 2017. Plantas Medicinales del Gran Chaco. San Lorenzo, Paraguay, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Asunción. 128 p.

Kuete, V. 2014. 21-Health Effects of Alkaloids from African Medicinal Plants. En: Toxicological Survey of African Medicinal Plants, Elsevier Inc. 2014, p 611-633. https://doi.org/ 10.1016/B978-0-12-800018-2.00021-2.

López, J. A.; E. L. Little; F. G., Ritz; J. S. Rombold y W. J. Hahn. 2002. Árboles comunes del Paraguay: Ñande yvyramáta kuéra. Universidad Nacional de Asunción - Facultad de Ciencias Agrarias, Cuerpo de Paz, Asunción, Paraguay, 2 ed., 458 p.

Lorenzi, H. 2013. Árvores brasileiras: Manual de identificação e cultivo de plantas arbóreas nativas do Brasil. Instituto Plantarum, Nova Odessa, São Paulo, Brasil, v. 2, 4 ed., 384 p.

Menezes, C. M. S.; K. Kirchgatter; S. M. Di Santi; G. A. Paula and E. I. Ferreira. 2001. In vitro evaluation of quinidine sensitivity in Brazilian Plasmodium falciparum isolates: Comparative analysis to quinine and chloroquine. Revista do Instituto de Medicina Tropical de Sao Paulo 43(4): 221-226. https://doi.org/10.1590/S0036-46652001000400009.

Mitaine-Offer, A. C.; M. Sauvain; A. Valentin; J. Callapa; M. Mallié and M. Zches-Hanrot. 2002. Antiplasmodial activity of Aspidosperma indole alkaloids. Phytomedicine 9(2): 142-145. https://doi.org/10.1078/0944-7113-00094

Nishibe, S.; A. Sakushima; H. Takemura; T. Takenaka and Y. Noguchi. 2001. Cyclitols from Apocynaceae Leaves. The Japanese Society of Pharmacognosy. Natural Medicines 55(5): 268-271. https://dl.ndl.go.jp/pid/10759825/1/1

Oliveira, V. B.; M. S. M. Freitas; L. Mathias; R. Braz-Filho y I. J. C. Vieira. 2009. Atividade biológica e alcalóides indólicos do gênero Aspidosperma (Apocynaceae): uma revisão. Revista Brasileira de Plantas Medicinais 11(1): 92-99. https://doi.org/10.1590/s1516-05722009000100015.

Ortega Torres, E.; L. Stutz de Ortega y R. Spichiger. 1989. Flora del Paraguay. Noventa especies forestales del Paraguay. C. et J. botaniques de la V. Geneve & M. B. Garden; Serie especial.

Pereira, M.; R. R. L. Jácome; A. F. Alcantara; R. B. Alves y D. S. Raslan. 2007. Alcalóides indólicos isolados de espécies do gênero Aspidosperma (apocynaceae). Quimica Nova 30(4): 970-983.

Peña-Chocarro, M. D.; J. De Egea; M. Vera; H. Maturo y S. Knapp. 2006. Guía de árboles y arbustos del Chaco Húmedo. The Natural History Museum, Guyra Paraguay-Fundación Moisés Bertoni-Fundación Hábitat y Desarrollo. Asunción, Paraguay, 291 p.

Pérez de Molas, L. F. 2016. Manual de Familias y Géneros de Árboles del Paraguay. FAO.

Pérez de Molas, L. F. 2021. Algunos árboles y arbustos del Chaco: guía de campo para el reconocimiento de las especies. FCA-UNA; INFONA, San Lorenzo, Paraguay. 118 p.

Remuzgo, J.; J. Alvarez; F. Sales y G. Valdivieso. 2020. Caracterización taxonómica y fitoquímica de Cinchona pubescens y Ladenbergia oblongifolia en el ámbito del valle Alto Huallaga - Región Huánuco. Rebiol 40(2): 242-255.

Rondón, M.; S. Moncayo; C. Xavier; J. Santos; V. David; R. Siguencia; et al. 2018. Preliminary phytochemical screening, total phenolic content and antibacterial activity of thirteen native species from Guayas province Ecuador. J. King Saud Univ., Sci. 30(4): 500-505. http://dx.doi.org/10.1016/j.jksus.2017.03.009

Sanabria, E. O.; M. Cayré y W. Frank. 2007. Optimización de producción de carbón con Aspidosperma quebracho blanco en la provincia del Chaco, Argentina. Chapingo Serie Ciencias Forestales y Del Ambiente 13(1): 23-27.

Sanabria, E. O.; M. E. Cayré y W. Frank. 2011. Evaluación de tres adhesivos en la fabricación de tableros enlistonados de Aspidosperma quebracho blanco estabilizado con polietilenglicol. Revista Chapingo Serie Ciencias Forestales y Del Ambiente XVII(1): 69-75. https://doi.org/10.5154/r.rchscfa.2010.05.030

Scotta, A. V.; G. A. Bongiovanni y E. A. Soria. 2017. Actividad moduladora in vitro de extractos acuosos de plantas americanas sobre la toxicidad inducida por clorpirifos en esplenocitos murinos. Revista de La Facultad de Ciencias Médicas 74(4): 325-330. https://doi.org/ 10.31053/1853.0605.v74.n4.15361

Sperling, H.; A. Lorenz; S. Krege; R. Arndt and M. C. Michel. 2002. An extract from the bark of Aspidosperma quebracho blanco binds to human penile α-adrenoceptors. Journal of Urology 168(1): 160-163. https://doi.org/10.1016/S0022-5347(05)64852-5

Stiborová, M.; J. Poljaková; E. Martínková; L. Bořek-Dohalská; T. Eckschlager; R. Kizek and E. Frei. 2011. Ellipticine cytotoxicity to cancer cell lines-a comparative study. Interdisciplinary Toxicology 4(2): 98-105. https://doi.org/10.2478/v10102-011-0017-7

Tanaka, J. C. A.; C.C. da Silva; I. C. P. Ferreira; G. M. C. Machado; L. L. León and A. J. B. de Oliveira. 2007. Antileishmanial activity of indole alkaloids from Aspidosperma ramiflorum. Phytomedicine 14(6): 377-380. https://doi.org/10.1016/j.phymed.2006.09.002.

Información adicional

redalyc-journal-id: 481

IR