Período de latencia: Suele ser de 8 a 24 horas. Los síndromes de aparición tardía (>6 horas) ocurren principalmente después de la ingestión de hongos letales (31).

Sintomatología: Este micetismo consta de tres fases: intestinal, de mejoría aparente y de lesión hepática (32). Durante la fase intestinal, los síntomas son: malestar, calambres abdominales, gastroenteritis, diarrea, a veces sanguinolenta, y vómitos severos. Se observa una importante pérdida de líquidos que provoca deshidratación. Esta primera fase puede ser causa de muerte (paro cardíaco o shock vascular) si la persona intoxicada no se pone en tratamiento.

Aproximadamente a los dos días de la ingestión de los carpóforos los síntomas desaparecen durante algunas horas (fase de mejoría aparente), lo cual hace pensar a la persona intoxicada que se encuentra fuera de peligro, pero sufre una recaída de 3 a 5 días después de la ingestión.

La tercera fase es la hepatotóxica que aparece hacia el tercer día después de la ingestión. Esta es la fase más grave, de marcada insuficiencia hepática.

Aproximadamente, una semana después de la ingestión, y debido a hemorragias internas o coma hepático, se puede producir la muerte.

Hace unos años se analizó el efecto de la ingestión de Amanita phalloides sobre las funciones cardíacas en una paciente intoxicada con este hongo, complicada con insuficiencia multiorgánica y shock cardiogénico debido a una disfunción sistólica ventricular izquierda avanzada (33). Posteriormente, tres pacientes intoxicados también sufrieron deterioro cardíaco transitorio con compromiso de la función sistólica ventricular izquierda, además de otras manifestaciones (34). Se logró un tratamiento efectivo, con la consiguiente recuperación de los pacientes intoxicados.

Toxinas: Los compuestos tóxicos son: amatoxinas, falolisina, falotoxinas y virotoxinas (35,36,37,38). El subgrupo más grande es el de las nueve amatoxinas (α-, β-, γ- y ε- amanitinas, amanulina, ácido amanulínico, amaninamida, amanina y proamanulina) (39) (Fig. 1) que son octapéptidos bicíclicos y se han identificado en 35 especies de hongos de los géneros Amanita, Galerina y Lepiota (40,41,42). La primera amatoxina que se aisló fue á-amanitina por Wieland et al. en 1941 (36)(43). Siete de las amatoxinas (α-, β-, γ- y ε- amanitinas, amanulina, ácido amanulínico y proamanulina) contienen una rara subestructura de 6-hidroxi-L-triptofano. Las amatoxinas son las únicas de esos compuestos que son tóxicas por vía oral y por lo tanto, responsables de los micetismos (44,45,46,47,48). Las amatoxinas son absorbidas en el tubo digestivo, son termoestables (no se destruyen por cocción) y no son volátiles (no se destruyen por desecación).

Figura 1
Estructuras químicas de las amatoxinas

Las falotoxinas (faloidina, profaloína, faloína, falisina, falacidina, falacina, falisacina) (Fig. 2) son heptapéptidos bicíclicos muy relacionados con las amatoxinas y también se aislaron del género Amanita (36)(49). Faloidina fue el primer péptido tóxico que se aisló de este género en 1937 (50). Si bien son extremadamente tóxicas cuando se administran por vía intravenosa, no lo son por vía oral ya que no son absorbidas por el aparato digestivo y por lo tanto no son causa de la intoxicación humana por ingestión de los hongos (12)(50)(51).

Figura 2
Estructuras químicas de las falotoxinas

Las virotoxinas (viroidina, desoxoviroidina, alaviroidina, aladesoxoviroidina, viroisina, desoxoviroisina) (Fig. 3) son péptidos tóxicos que se encuentran singularmente en los hongos Amanita virosa (52) y recientemente se encontraron en Amanita subpallidorosea (53). A diferencia de las falotoxinas que son bicíclicas, las virotoxinas son heptapéptidos monocíclicos y contienen D-serina en lugar de .-cisteína. Además, las virotoxinas poseen dos aminoácidos que no se habían encontrado anteriormente en la naturaleza: 2,3-trans-3,4-dihidroxi- L-prolina y 2’-(metilsulfonil)-L-triptofano (54). Las virotoxinas, como las falotoxinas, sólo son tóxicas por vía endovenosa (36). Recientemente se ha estudiado la biosíntesis de los ciclopéptidos tóxicos de Amanita (55).

Figura 3
Estructuras químicas de las virotoxinas

Otro grupo de ciclopéptidos, antamanida y cicloamanidas A-D (Fig. 4), también son producidos por Amanita phalloides. La antamanida es un ciclopéptido que contrarresta a la faloidina (35). La química, bioquímica y aspectos biológicos moleculares de los ciclopéptidos tóxicos en Amanita fueron tratados por Wieland (50).

Figura 4
Otros ciclopéptidos presentes en Amanita phalloides: Antamanida y cicloamanidas A-D

También de extractos acuosos de Amanita phalloides se aisló una hemolisina tóxica denominada falolisina, que es una mezcla de dos o tres proteínas citolíticas de estructura similar, cada una con un peso molecular de 34 kDa. Ha demostrado actividad hemolítica in vitro. Dado que el jugo gástrico del estómago destruye esta toxina, no hace daño por vía oral (35).

También se aisló toxofalina, que es una proteína tóxica del cuerpo fructífero de Amanita phalloides y se caracterizaron sus principales propiedades fisicoquímicas y biológicas (56). Esta proteína posee una masa molecular de 55 kDa y un punto isoeléctrico pI 5,7 y se expresa predominantemente en el tallo del carpóforo. Como se evaluara mediante experimentos de entrecruzamiento, toxofalina forma un complejo trimérico en solución con buffer. Induce la apoptosis en varias líneas celulares de mamíferos (L1210 y CCL-64 murinas, y A549 humanas) con IC₅₀ de 0,25-0,45 μg/mL. Las características físico-químicas, químicas y biológicas de toxofalina difieren claramente de las de falolisina. Toxofalina induce la fragmentación del ADN y los cambios morfológicos en los núcleos de las células diana (condensación de cromatina y fragmentación de núcleos), que son características de la apoptosis. El inhibidor de caspasa III (Boc-Dfmk: benciloxicarbonil-Asp(OMe)-fluorometil-cetona) no inhibe la fragmentación apoptótica del ADN inducida por toxofalina, lo que sugiere que esta toxina implica una vía de apoptosis independiente de la caspasa (56). Sin embargo, recientemente se demostró que las L-aminoácido-oxidasas de Amanita phalloides y Clitocybe geotropa inducen apoptosis dependiente de caspasas (57); estas L-aminoácido-oxidasas inducen apoptosis en líneas celulares cancerosas Jurkat a través de las vías intrínseca y extrínseca, si bien el aumento significativamente mayor de caspasa 9 sobre la actividad de caspasa 8 sugiere que es la vía intrínseca el modo predominante de la apoptosis inducida por estas oxidasas (57).

Se demostró anteriormente que la interacción de toxofalina con las células diana no está mediada por un receptor específico de la superficie celular (56). La estructura primaria de toxofalina se estudió parcialmente a través de la secuenciación directa de sus péptidos trípticos, seguida por la clonación basada en PCR del ADNc correspondiente (58). Una búsqueda bioinformática subsiguiente reveló una homología estructural de toxofalina con la L-aminoácido-oxidasa del hongo Laccaria bicolor. También se encontró una amplia especificidad de sustrato de toxofalina con respecto a la oxidación de aminoácidos seleccionados. El ácido ascórbico inhibió el efecto citotóxico de toxofalina, muy probablemente como resultado de la captación de peróxido de hidrógeno, que es el producto de la catálisis de las oxidasas.

Por lo tanto, además de los ciclopéptidos altamente tóxicos y la lectina tóxica falolisina, A. phalloides contiene toxofalina que es una proteína citotóxica con propiedades de la enzima L-aminoácido-oxidasa.

Varios basidiomicetos presentan actividad de L-aminoácido- oxidasas con amplia especificidad de sustrato y una variedad de masas moleculares aparentes que varían de 25 a 200 kDa, siendo más activas a pH 5,5 que a pH 8,0 (59).

También se han aislado e identificado compuestos de bajo peso molecular como el ácido (2S,4S)-4-hidroxi- 2-pirrolidincarboxílico y el ácido (2S,3R,4R)-3,4-dihidroxi- 2-pirrolidincarboxílico (Fig. 5) en Amanita phalloides y A. verna respectivamente (5).

Figura 5
Estructuras químicas de los ácidos hidroxiprirrolidincarboxílicos presentes en Amanita phalloides y A. verna

Mecanismo de acción: Las amatoxinas son un grupo de toxinas hepatotóxicas, de efectos mortales incluso a dosis mínimas. áα-, β- yγ-Amanitinas se han identificado como los miembros más potentes de esta familia de compuestos, con valores de DL₅₀en el rango de 0,2 a 0,5 mg/kg (36).

Las falotoxinas no son tóxicas por vía oral, sino por vía endovenosa, dañan los hepatocitos, interactúan con la F-actina celular e interrumpen la despolimerización de los microfilamentos (51)(60). Esta interacción con actina ha hecho que se use faloidina en la investigación biomédica, con análogos fluorescentes que se utilizan para visualizar los filamentos de actina en células vivas y fijas, así como in vivo (61). Cuando se inyectan en ratones, las falotoxinas son 10 veces más letales que el cianuro: su DL₅₀ es de 2 mg/kg. En cambio, las amatoxinas son mucho más mortales y son activamente tóxicas por vía oral (DL₅₀ =0,1 mg/kg).

La actividad biológica de viroisina es comparable a la de las faloxinas, ya que su DL₅₀ es de 2,5 mg/kg (ratón blanco), causando la muerte de los animales dentro de las 2-5 horas, por hemorragia hepática (54). Además, a nivel molecular, las virotoxinas se comportan de manera similar a las falotoxinas. Así, viroisina se une a la actina del músculo de conejo, como se demostrara por espectroscopía UV diferencial. Con una constante de equilibrio aparente de disociación KD ~ 2 x 10-8 M, la afinidad de viroisina es muy similar a la de faloidina. Sin embargo, la flexibilidad de la estructura monocíclica y la presencia de dos grupos hidroxilo adicionales en las virotoxinas sugieren un modo diferente de interacción con actina. Si bien hay pruebas de que las falotoxinas bicíclicas poseen un sitio de unión rígido, las virotoxinas pueden adoptar la conformación biológicamente activa mediante un mecanismo de ajuste inducido por contacto con la actina (54).

Se realizó un estudio sobre la reacción hepática de ratones a la intoxicación aguda con virotoxinas y faloidina, péptidos cíclicos aislados del hongo Amanita virosa (51). Las fracciones purificadas se administraron por vía intraperitoneal a varias dosis para determinar la DL₅₀ que varió de 1,0 a 5,3 mg/kg, siendo viroidina, faloidina y viroisina las más potentes. Las virotoxinas y la faloidina indujeron necrosis hemorrágica del hígado. El desarrollo de lesiones hepáticas fue seguido por una actividad aumentada de alanina-aminotransferasa (ALT) sérica, así como por cambios detectados en microscopio óptico y electrónico. En grupos adicionales, los conductos biliares se canularon y se recogió bilis durante 2 horas después de la inyección de los péptidos (1 mg/kg) para determinar su potencial colestásico. Los primeros cambios en los hepatocitos fueron la invaginación de la membrana plasmática y la formación de vacuolas citoplásmicas. En períodos posteriores, la acumulación de eritrocitos fue evidente en las vacuolas y en el citoplasma. La gravedad del daño hepático, según el análisis morfológico, se correlacionó con la actividad de ALT sérica. Dos de los péptidos ensayados (viroisina y faloidina) disminuyeron el flujo biliar en más del 50% sobre los controles. Durante el desarrollo de la colestasis se observaron alteraciones ultraestructurales leves en el polo canalicular biliar de los hepatocitos. Dado que las virotoxinas, como la faloidina, están unidas a la actina, es posible que su afinidad por la actina celular pueda ser responsable de su hepatotoxicidad (51).

Las amatoxinas, especialmente las que poseen la subestructura de 6-hidroxi-L-triptofano, actúan como inhibidores selectivos de la ARN polimerasa II, una enzima vital en la síntesis del ARNm (36)(62). Principalmente, α-amanitina y β-amanitina, actúan bloqueando el complejo de ARN-polimerasa II, que da como resultado la inhibición de la transcripción de ADN (paso de ADN a ARNm) y de los procesos de síntesis de proteínas esenciales, conduciendo a la muerte de los hepatocitos (63). α-Amanitina también es un fuerte inductor de apoptosis y puede jugar un rol significativo en la patogénesis del daño hepático en el curso de la intoxicación con amatoxinas.

Los datos cristalográficos de rayos X presentados por Bushnell et al.(64) exploraron en detalle el mecanismo de unión de α-amanitina a ARN polimerasa II. Esa unión previene los cambios conformacionales necesarios para realizar la transcripción, reduciendo así la translocación del ADN de varios miles a un puñado de nucleótidos por minuto Si bien la inhibición de la síntesis de proteínas causa daño generalizado en el cuerpo humano, son lesiones irreversibles en las células cardíacas y hepáticas, que resultan fatales (60). El hígado es el principal órgano afectado, ya que es el primer órgano con el que entra en contacto la toxina después de su absorción por el tracto intestinal (65).

Especies causantes del micetismo por amatoxinas: Son especies pertenecientes a los géneros Amanita, Galerina y Lepiota, así como también Conocybe filaris; todas contienen amatoxinas.

Reino: Fungi; División: Basidiomycota; Clase: Agaricomycetes; Orden: Agaricales: Familia: Amanitaceae: Amanita phalloides (Vaill. ex Fr.) Secr. [Basónimo: Agaricus phalloides Vaill. ex Fr.] (sección Phalloideae) crece en Europa y en Argentina, en las provincias de Entre Ríos, Santa Fe, Buenos Aires, Mendoza y Río Negro (2)(21)(66); Amanita ameghinoi (Speg.) Singer [Bas.: Armillaria ameghinoi Speg.] (sección Lepidella) crece en Argentina, en las provincias de Tucumán, Catamarca y Buenos Aires (21)(66); Amanita phalloides var. alba; Amanita bisporigera (67); Amanita exitialis (sección Phalloideae) del este de Asia (68); Amanita fuliginea (se describió originalmente en Japón y es responsable de la mayoría de las intoxicaciones fatales en el sur de China) (69); Amanita subpallidorosea (especie letal recientemente descubierta en China, de Amanita sección Phalloideae, que se agrupa con A. virosa en el mismo clado según el análisis filogenético molecular) (53); Amanita porrinensis; Amanita verna (Bull.) Lam. (46)(70); Amanita verna var. decipiens; Amanita virosa (Fr.) Bertill.

Familia: Cortinariaceae: Galerina marginata (Batsch) Kühner [Bas.: Agaricus marginatus Batsch] pertenece a los pequeños hongos marrones; se encuentra en Europa, Asia, Australia, América del Norte y América del Sur (provincia de Tucumán en Argentina) (27)(66). Antiguas especies como Galerina autumnalis, Galerina oregonensis, Galerina unicolor y Galerina venenata ahora todas corresponden a G. marginata, en base a las pruebas genéticas. Todas las especies del género Galerina son saprófitos, ya que crecen en madera muerta o en descomposición, generalmente coníferas.

Familia: Agaricaceae: Lepiota brunneoincarnata; Lepiota brunneolilacea. Lepiota castanea; Lepiota cristata (Bolton) P. Kumm. [Bas.: Agaricus cristatus Bolton] crece en Argentina, en las provincias de Buenos Aires, Neuquén, Río Negro y Córdoba (2)(25)(66); Lepiota cristata var. vicarii (Raithelh.) Raithelh. crece en Argentina, en la provincia de Buenos Aires (25)(66); Lepiota helveola Bres. crece en Argentina, en las provincias de Misiones y Buenos Aires (71,72,73) pertenece al grupo de las pequeñas lepiotas blancas, muy tóxicas, y se confunde por su parecido con Macrolepiota procera (Scop.) Singer comestible, que crece en Buenos Aires (25), pero esta última tiene una talla muy superior; Lepiota kuehneri. Lepiota lilacea. Lepiota pseudohelveola; Lepiota subincarnata J.E. Lange (=Lepiota josserandii Bon & Boiffard) crece en Buenos Aires (2)(25)(66); Macrolepiota neomastoidea (Hongo) Hongo [Bas.: Lepiota neomastoidea Hongo] (74).

Familia: Bolbitiaceae: Conocybe filaris (Fr.) Kühner [Bas.: Agaricus togularis var. filaris Fr.] es común en el noroeste del Pacífico y crece también en Argentina, en las provincias de Tucumán y Buenos Aires (2)(23)(47)(65)(66).

Período de latencia: Entre 8 y 14 horas después de la ingesta.

Síntomatología: En los casos leves, se manifiesta con trastornos digestivos, vómitos y diarrea. La gastroenteritis puede provocar una gran pérdida de volumen de fluidos. En otros casos más serios, se inicia con síntomas gastrointestinales 1-12 horas después de la ingestión, seguidos de una insuficiencia renal aguda grave de aparición tardía, después de 2-6 días, habiendo sido necesarias hasta 9 sesiones de hemodiálisis para lograr la normalización de la persona intoxicada (31)(75)(76). Ha habido un caso de envenenamiento con Amanita pseudoporphyria por nefrotoxinas, presentando insuficiencia renal aguda de aparición tardía asociada con la ingestión de este hongo, en un hombre con diabetes de 66 años. Los efectos fueron similares a los síntomas de intoxicación asociados con las especies Amanita smithiana norteamericana y Amanita proxima mediterránea. La biopsia renal del paciente mostró necrosis tubular aguda con anomalías glomerulares menores. El tratamiento incluyó un período de hemodiálisis de tres semanas, después del cual el paciente se recuperó completamente de la insuficiencia renal aguda en dos meses (77).

La intoxicación con Amanita proxima también se ha asociado con cardiotoxicidad (78).

Toxinas: La acción dañina sobre el riñón parece deberse a la presencia de aminoácidos tóxicos, no proteicos, que contienen la subestructura de aleno, como norleucina alénica (ácido 2-amino-4,5-hexadienoico), y que contienen un grupo alquino, como propargilglicina (sinónimos: DL-propargilglicina; ácido 2-aminopent- 4-inoico; ácido 2-amino-4-pentinoico) (Fig. 6), que se encuentran en Amanita proxima (0,25% en peso seco, de norleucina alénica). Norleucina alénica es nefrotóxica y propargilglicina es hepatotóxica. Amanita boudieri y A. solitaria .A. echinocephala) también contienen norleucina alénica (A. boudieri: ~1,2% en peso seco y A. solitaria: ~2,6% en peso seco).

Figura 6
Estructuras químicas de norleucina alénica y propargilglicina

También se han encontrado aminoácidos no proteicos clorados. Norleucina alénica, ácido trans-2-amino-5-cloro- 4-hexenoico (clorocrotilglicina) y ácido trans-2-amino- 5-cloro-6-hidroxi-4-hexenoico (Fig. 7) se obtuvieron de Amanita solitaria (Amanita echinocephala) (79). Norleucina alénica se encontró también en A. pseudoporphyria (80), junto con el ácido L-2-amino-4-cloro-4-pentenoico (Fig. 7). Norleucina alénica y clorocrotilglicina se encuentran en Amanita smithiana (81).

Figura 7
Estructuras químicas de clorocrotilglicina, ácido trans-2-amino- 5-cloro-6-hidroxi-4-hexenoico y ácido L-2-amino-4-cloro-4-pentenoico

También hay aminoácidos no proteicos con grupos metileno y con azufre en especies del género Amanita. Se ha encontrado ácido (2S)-amino-3-metilenhexanoico (β-metilen-L-(+)-norleucina) (Fig. 8) en Amanita vaginata var. fulva (5). La especie Amanita vaginata y sus variedades generalmente se consideran comestibles, pero se han registrado intoxicaciones por ingestión posiblemente debidas a estos aminoácidos no comunes (82). Ácido (1’R,2R)-[(2-amino- 2-carboxietil)tio]butanodioico y ácido (1’S,2R)-[(2- amino-2-carboxietil)tio]butanodioico (Fig. 8) se encontraron en A. pantherina (83).

Figura 8
Estructuras químicas de β-metilen-L-(+)-norleucina, ácidos (1’R,2R)- y (1’S,2R)-[(2-amino-2-carboxietil)tio]butanodioicos

Especies causantes del micetismo: Amanita proxima .Amanita, sección Roanokenses) provoca frecuentes intoxicaciones en Francia y en España, observándose un aumento de los casos con el tiempo (85). Amanita boudieri y A. solitaria (A. echinocephala) causan micetismos nefrotóxicos en Portugal y en Alemania, respectivamente. Amanita pseudoporphyria crece de manera solitaria o gregaria en bosques de coníferas; originalmente descripta en Japón, ahora también se la conoce en el norte de India, Tailandia, Nepal y en el sur de China, donde se vende en mercados, junto con el hongo similar, Amanita manginiana.

Amanita smithiana ha causado numerosas intoxicaciones en EE.UU. (Oregon y Washington) (86), así como en el noroeste del Pacífico y en Taiwan (81), dado que se confunde con el popular hongo comestible Tricholoma magnivelare (“Matsutake”) (87). También producen este micetismo: A. sphaerobulbosa (Sudeste Asiático), A. thiersii (EE.UU.) y A. pseudoporphyria (Japón).

En Argentina crece Amanita vaginata (Bull.) Lam. (Bas.: Agaricus vaginatus Bull.) en Tierra del Fuego (21).

El síndrome de eritromelalgia se ha descripto ya a fines del siglo XIX en Japón y Corea del Sur con Clitocybe acromelalga, y desde 1996 en Francia y luego en Italia con C. amoenolens(76). Algunos autores, erróneamente, dan como sinónimos eritromelalgia y acromelalgia, quizás por confusión con la especie descripta en Japón. Se debe recordar que la acromelalgia o síndrome de piernas inquietas hereditario es una enfermedad neurológica motora con parestesias y disestesias (sensaciones molestas o dolorosas) en las piernas, que ocurren generalmente durante el sueño o al descansar. En cambio, la eritromelalgia es una vasodilatación paroxística de arterias pequeñas, más frecuente en pies y manos con dolor urente y aumento de temperatura con eritema, es decir, corresponde a la descripción presentada para este toxíndrome.

Período de latencia: Larga, de hasta 24 horas, o más.

Sintomatología: Se presenta un cuadro de crisis de violentos dolores paroxísticos, acompañados de sensación de quemazón (dolor urente) en las manos y sobre todo en los pies. Durante las crisis, las manos, los pies y la nariz presentan aumento de temperatura, enrojecimiento (eritema) e hinchazón (edema). Estos síntomas pueden persistir durante días, semanas, y en algún caso, durante varios meses, siendo necesario, en los casos más graves, el uso de morfina para mitigar los dolores.

Toxinas. Ácidos acromélicos A-E (Fig. 9), de estructura química muy similar a la de los ácidos kainico y domoico. Son aminoácidos hidrosolubles y termoestables que se han identificados en ambas especies de Clitocybe, C. acromelalga, C. amoenolens (3)(4)(76).

Figura 9
Estructuras químicas de los ácidos acromélicos A-E.

Otros aminoácidos no proteicos aislados de Clitocybe acromelalga se muestran en la Fig. 10(5).

Figura 10
Estructuras químicas de aminoácidos no proteicos aislados de Clitocybe acromelalga

Mecanismo de acción: Los ácidos acromélicos son agonistas potentes de los receptores del glutamato. El mecanismo de acción de estas sustancias radicaría en un trastorno del metabolismo del triptofano que lesionaría fibras del sistema nervioso autónomo (76).

Especies causantes del micetismo: División: Basidiomycota; Clase: Agaricomycetes; Orden: Agaricales: Familia: Tricholomataceae. Clitocybe acromelalga. Clitocybe amoenolens. Clitocybe gibba; Orden: Boletales: Familia: Hygrophoropsidaceae. Hygrophoropsis aurantiaca (76).

Las especies relacionadas con este micetismo son las llamadas “falsas morillas”, ascomicetos de la familia Helvellaceae, y generalmente se encuentran en coníferas, álamos y, a veces, en bancos de nieve que se están derritiendo. La especie más comúnmente asociada con la intoxicación y estudiada con mayor detalle es Gyromitra esculenta, pero las toxinas se han encontrado en otras especies de Helvellaceae (88). También el consumo de grandes cantidades en una sola comida o en días sucesivos de la “falsa morilla” Verpa bohemica (Familia: Morchellaceae) que es una especie comestible del norte de América del Norte, Europa y Asia, causa intoxicaciones en personas susceptibles (88). Asimismo, la intoxicación por algunas especies de Helvella, Verpa, Peziza, Disciotis y Sarcosphaera se asemeja mucho al síndrome causado por Gyromitra esculenta, por lo que se ha especulado que estos hongos tendrían las mismas toxinas, aunque aún no se ha confirmado.

Las morillas verdaderas, comestibles, que se comercializan han sido a veces mezcladas inadvertidamente por los recolectores con Gyromitra esculenta . Verpa bohemica, produciendo así intoxicaciones, según lo registrara la Administración de Alimentos y Medicamentos de EE.UU. (FDA: Food and Drug Administration) (89).

Período de latencia: La incubación dura de seis a doce horas, a veces cuatro a doce horas, raramente menor de dos horas.

Síntomatología: Los primeros trastornos se presentan con dolor de cabeza, malestar gastrointestinal, náuseas, diarreas y vómitos, seguidos de deshidratación, hipotensión y alteraciones del ritmo cardíaco. Los efectos gastrointestinales pueden durar hasta 2 días en humanos. Los temblores, la debilidad y la ataxia también pueden aparecer en los primeros 2 días. En casos graves, aunque raros, pueden aparecer ictericia, metahemoglobinemia, hemólisis, convulsiones y coma (incluido coma hepático) varios días después de la exposición (88)(90). En raras oportunidades, la hemólisis puede dar lugar a rabdomiólisis y a alteración de la función renal.

Las características más típicas son las alteraciones del sistema nervioso central y el nivel de glucemia. En la intoxicación severa, ocurre una segunda fase hepatorrenal después de un período sin síntomas.

Estos casos pueden ser fatales (91). En casos graves hay trastornos nerviosos, así como alteración hepática y del bazo. Es posible la muerte a los dos o cuatro días de la intoxicación debido a insuficiencia circulatoria o paro respiratorio (92).

Es decir, se trata de una afección cardiocirculatoria, neurológica, hepática y renal, produciéndose en algunos casos hemólisis.

Al igual que con todos los micetismos, la identificación del material fúngico, por parte de un micólogo experimentado, es fundamental para llegar a un diagnóstico. En las unidades sanitarias, el diagnóstico se basa principalmente en la identificación de los hongos y en los signos clínicos y anomalías de laboratorio.

Toxinas. Giromitrina (N-metil-N-formilhidrazona de acetaldehído) (Fig. 11), el compuesto que se encuentra en estos hongos, “falsas morillas”, es un irritante directo del tracto gastrointestinal. Algunas especies del género Gyromitra no son tóxicas, mientras que otras, como la ampliamente distribuida G. esculenta, contienen niveles tóxicos de giromitrina (40-700 mg/kg materia fresca) y varios compuestos menores relacionados químicamente (91). La concentración de giromitrina varía según la especie, localidad y estación, lo que lleva a una variación considerable en el grado de intoxicación (88).

Figura 11
Hidrólisis ácida de giromitrina dando N-metil-N-formilhidrazina y N-metilhidrazina

En los seres humanos, parece haber una gran variabilidad individual con respecto a la toxicidad de las falsas morillas. En ratones, las DL₅₀ orales de giromitrina, N-metil-N-formilhidrazina y monometilhidrazina (o N-metilhidrazina) (Fig. 11) son 344, 118 y 33 mg/kg respectivamente (93). En humanos, la dosis letal estimada de giromitrina es 20-50 mg/kg para adultos y 10-30 mg/kg para niños. No se ha establecido la toxicidad para perros o gatos (88).

Mecanismo de acción de las toxinas: Giromitrina (N-metil-N-formilhidrazona de acetaldehído) es la toxina más abundante presente en el hongo silvestre Gyromitra esculenta, en el que se identificaron nueve N-metil- N-formilhidrazonas volátiles (94). Una vez ingeridos los hongos, la giromitrina se hidroliza rápidamente en las condiciones ácidas del estómago, formando hidrazinas cancerígenas y tóxicas de fácil absorción, como N-metilformilhidrazina, que a su vez se metaboliza a N-metilhidrazina (Fig. 11). Cuando las hidrazinas alcanzan el hígado, se metabolizan adicionalmente a especies reactivas, como cationes metilo y radicales metilo. Esta conversión de giromitrina en N-metilhidrazina a pH ácido se ha demostrado en el estómago del ratón después de la administración oral de giromitrina (94). El grado de hidrólisis depende del pH en el estómago, pero no es completa (93). La respuesta individual a giromitrina es variable.

Estas toxinas son termolábiles, volátiles y solubles en agua (90). Por lo tanto, las intoxicaciones pueden ocurrir no sólo por ingerir los hongos, sino también al inhalar los vapores al cocinarlos. También se observaron efectos tóxicos típicos en personas que manipulan con frecuencia hongos que contienen giromitrina (88).

También influye la cantidad que se consume; el consumo sucesivo de pequeñas cantidades de carpóforos que contengan giromitrina e hidrazinas llega a ser tóxico, debido a que las dosis son acumulativas. A su vez, las personas que comen sólo algunos hongos cocidos pueden ingerir cantidades suficientemente desintoxicadas para no tener síntomas. Esto ha causado malentendidos entre las personas sobre la posible letalidad de estos hongos.

Los síntomas aparecen si los carpóforos son consumidos poco cocidos, con el agua de cocción, o en estado fresco (puede ser mortal si se consume sin desecar).

Los animales generalmente comen carpóforos crudos; por lo tanto, cualquier exposición a estos hongos puede ocasionarles morbilidad y mortalidad graves (88).

Si se desea comer estos hongos, se recomienda hervirlos con grandes cantidades de agua (descartando el agua antes del consumo) (95), secando las muestras antes de comer (96) o, si se comen por primera vez, restringir el consumo a porciones pequeñas para probar su tolerancia.

El contenido de giromitrina se reduce por el secado prolongado al aire o por la cocción de carpóforos frescos y secos. Sin embargo, sólo se remueven moléculas libres de giromitrina durante el secado; para aquellas que están unidas orgánicamente, queda aproximadamente la mitad del contenido de toxina. Es por eso que se dice que el proceso de ebullición y secado disminuye, pero no elimina por completo a las toxinas. La ebullición debe repetirse varias veces en grandes volúmenes de agua en un recipiente abierto para permitir la evaporación de las hidrazinas volátiles. Si se cocina en una olla cerrada, las sustancias tóxicas se conservarán (91).

Análisis de giromitrina y metilhidrazina: Se desarrolló un método para determinar el contenido total de hidrazonas basado en la hidrólisis ácida de giromitrina y otras hidrazonas relacionadas en carpóforos de Gyromitra esculenta secados al aire; con derivatización de N-metilhidrazina con cloruro de pentafluorobenzoílo (97). El derivado, tris-pentafluorobenzoílmetilhidrazina (tris- PFB-MH) se analizó por cromatografía de gases-espectrometría de masa (CG-EM). La precisión del método resultó mejor que 10% (desviación estándar relativa) para 0,5 ng/μL de N-metilhidrazina en solución. La concentración mínima detectable de N-metilhidrazina (tris-PFB-MH) por este método resultó ser de aproximadamente 12 pg/μL, que es igual a 0,3 μg/g de materia seca del hongo. El método sirve como monitor del contenido de la toxina giromitrina.

Toxicodinamia: Giromitrina se considera un irritante gastrointestinal que conduce a signos clínicos de vómitos, dolor abdominal y diarrea 6-12 h después de la ingestión del hongo tóxico (98). La principal toxina responsable de las convulsiones que se observan en los casos graves de envenenamiento por Gyromitra es N-metilhidrazina. La N-metilhidrazina es en parte responsable de los signos neurológicos, ya que inhibe a la piridoxal-fosfoquinasa, dando como resultado una disminución de las concentraciones de piridoxal-5-fosfato, con la subsiguiente disminución de la síntesis del ácido g-aminobutírico (GABA) y un aumento en las concentraciones de ácido glutámico, aumentando así la susceptibilidad a las convulsiones. En un estudio en ratones, se evidenció que las concentraciones de GABA en el cerebro no disminuyeron significativamente en respuesta a las cantidades tóxicas de N-metilhidrazina (99). Por lo tanto, los efectos tóxicos de giromitrina no son sólo atribuibles a N-metilhidrazina. Además de la irritación gastrointestinal y la neurotoxicidad, se han descripto fallas hepáticas y renales, así como hemólisis. En estudios en animales se demostró que N-metil-N-formilhidrazina, otro metabolito de giromitrina, produce la depleción de citocromo P₄₅₀ dentro de las 8-12 horas posteriores a la administración de giromitrina (99), mientras que N-metilhidrazina no presenta efectos hepatotóxicos similares. Los compuestos de hidrazina muestran efectos irritantes en las membranas de las mucosas y también en el tracto gastrointestinal.

Además, todas estas hidrazinas presentes en las morillas falsas, como .-metilhidrazina, son muy tóxicas para humanos y animales, con capacidad hemolítica y cancerígena (100). Se observaron anorexia, inflamación del pulmón y del hígado, pérdida de peso y nefritis intersticial después de la inhalación de compuestos de hidrazina en experimentos con animales (101). Además, los compuestos de hidrazina son responsables del agotamiento del glutatión en los eritrocitos y de la destrucción de macromoléculas en el hígado, posiblemente mediante el desarrollo de radicales metilo (101).

En un informe de un caso veterinario, se muestran los efectos del consumo de estos hongos crudos; un perro de 10 semanas vomitó 2-3 horas después de masticar un hongo identificado posteriormente como G. esculenta; 6 horas después de la ingestión, el perro estaba letárgico, se volvió comatoso y murió 30 minutos después. Los hallazgos histopatológicos incluyeron tubulonefrosis renal, degeneración hepática periascinar y eritrofagocitosis (88).

Especies causantes del micetismo: División: Ascomycota; Clase: Ascomycetes; Orden: Pezizales: Familia: Helvellaceae. Gyromitra esculenta. Gyromitra fastigiata. Gyromitra gigas. Gyromitra infula (102). Familia: Helvellaceae. Helvella crispa. Helvella elastica. Helvella lacunosa. Helvella macropus; Familia: Morchellaceae. Verpa bohemica. División: Ascomycota; Clase: Leotiomycetes; Orden: Leotiales: Familia: Leotiaceae. Leotia lubrica. División: Ascomycota; Clase: Leotiomycetes; Orden: Helotiales: Familia: Cudoniaceae: Cudonia circinans. Spathularia flavida. División: Ascomycota; Clase: Pezizomycetes; Orden: Pezizales: Familia: Pezizaceae. Peziza badia (88).

Las especies del género Morchella o Morchella spp. (“morillas verdaderas”; “hongo de ciprés”; “múrgoles”; “colmenillas”) son hongos ascomicetos medicinales y comestibles, muy apreciados por los gourmets franceses, españoles y argentinos en la Patagonia andina, caracterizados por poseer ascocarpos de aspecto reticulado. Debido a su alto valor económico y científico, el género Morchella Dill. ex Pers: Fr. se ha convertido en un tema de investigación clave, por su taxonomía, diversidad y distribución de especies, diversidad ecológica, filogenia y biogeografía, cultivo artificial y genoma (103).

Se han informado varios casos de intoxicación por morillas, con síntomas gastrointestinales y neurológicos, con síndrome inebrante (tipo embriaguez) en algunos casos. Se debe tener precaución con los carpóforos pertenecientes a los Ascomycetes, pues suelen contener sustancias tóxicas de las que apenas se conocen sus efectos en el organismo humano.

Período de latencia: Entre 5-20 horas. Lo común es que a las 5-6 horas después de la ingestión se manifiesten los síntomas gastrointestinales y a las 10-12 horas el síndrome neurológico (104).

Síntomatología: Es una intoxicación leve y pasajera, pero que incapacita al intoxicado de manera alarmante. Los primeros síntomas son gastrointestinales (náuseas, vómitos, diarrea y dolor abdominal). Ocasionalmente, estos síntomas gastrointestinales se asocian con urticaria o picazón. Luego siguen los síntomas neurológicos con síndrome inebrante. Los síntomas pueden incluir hipotonía muscular, alteración del equilibrio, apareciendo una marcha característica (ataxia cerebelosa o marcha de ebrio), dismetría, habla escandida (pronunciación involuntaria de las palabras en las sílabas que las componen, alterando el habla), disdiadocoquinesia (incapacidad para realizar movimientos alternantes rápidos con las manos; por ejemplo: dificultad para abrocharse los botones), temblor intencional por falta de cálculo de la fuerza y la distancia que hay que ejercer para los diferentes movimientos. Una variedad de otros efectos que se observaron ocasionalmente, como parestesias y disartria (dificultad para hablar), con marcados efectos inebrantes. Estos signos indican problemas en el cerebelo, y se acompañan de náuseas y vómitos bruscos.

Ya en 1889 Roumeguère informó intoxicaciones con morillas (104). Posteriormente hubo otros registros sobre el tema, todos los cuales adolecen de falta de datos importantes, como la identificación de los hongos consumidos, las condiciones de cocción y las cantidades consumidas (10)(104).

Se hicieron conocer seis casos de personas que desarrollaron efectos cerebelosos 6-12 horas después del consumo de morillas comestibles (Morchella conica var. deliciosa y Morchella esculenta) en Oberbayern, Alemania (105). Los síntomas fueron autolimitados y desaparecieron después de un día. Todos trajeron las muestras de los hongos que habían consumido, que se identificaron macroscópicamente y por identificación microscópica de las esporas. En todos los casos, las pruebas de laboratorio de rutina fueron normales.

Unos ingresaron con marcha atáxica, pupilas mióticas y un temblor fino. Otros, además, con ataxia de tronco y miembros que les impedía escribir, y adiadocoquinesia (falta de coordinación de los movimientos corporales; signo clínico que se relaciona con el cerebelo, que es el centro de coordinación del cerebro). Algunos con náuseas, además de los síntomas mencionados.

Todos los síntomas se resolvieron completamente dentro de un día.

El centro de control de intoxicaciones reportó otros 10 casos similares; dos de ellos desarrollaron mareos, marcha atáctica y visión borrosa (105).

Gyromitra esculenta, que causa efectos neurotóxicos, si bien tiene otro fenotipo, podría ser confundida con las morillas comestibles, especialmente por recolectores de hongos con poca experiencia. Sin embargo, Gyromitra no crece en esa región, crece en otra época, predominantemente a fines del verano/otoño, tiene otro fenotipo y además es un hongo hepatotóxico. Los casos descriptos no mostraron signos de hepatotoxicidad.

En la literatura micológica, se han informado anteriormente casos esporádicos con síntomas neurológicos (106): seis personas en una familia de siete miembros tenían mareos y efectos inebrantes después de una comida de 3 kg de Morchella esculenta; una persona permaneció asintomática, aunque las comió por segunda vez al día siguiente. Nothnagel (106) cita a Jaccodet, quien en 1930 informó que Morchella conica causaba una especie de embriaguez leve.

Varias intoxicaciones con morillas con síndrome neurológico se han registrado en centros de control de intoxicaciones en América del Norte (107) y en Francia (104).

Se hizo un estudio retrospectivo de 20 años de intoxicaciones con morillas registradas en Centros Franceses de Control de Intoxicaciones describiendo una serie de casos bien documentados con efectos neurológicos después de su consumo (104). Los casos se clasificaron como síndrome neurológico (temblor o mareo/efecto inebrante o inestabilidad/ataxia, a veces asociados con síntomas gastrointestinales) o síndrome gastrointestinal aislado (náuseas, vómitos, diarrea y dolor abdominal). Ocasionalmente, los síntomas gastrointestinales se asociaron con urticaria o picazón (104).

Los resultados mostraron que 146 pacientes presentaron síndrome gastrointestinal 5 horas tras la ingesta, y 129 presentaron síndrome neurológico 12 horas después del consumo de morillas. Los pacientes con síndrome neurológico experimentaron más comúnmente temblor (53%), mareos/efecto inebrante (53%) o inestabilidad/ ataxia (21%), con o sin síntomas gastrointestinales. Los síntomas gastrointestinales (67%) y otros síntomas neurológicos también estuvieron simultáneamente presentes (principalmente trastornos oculares/ de visión: 26%, parestesias: 7%, somnolencia/confusión: 6% y trastornos musculares: 6%). Los problemas visuales generalmente fueron diplopía o visión borrosa. Estos pacientes ingirieron con mayor frecuencia una gran cantidad de morillas (104).

Dentro de las 24 horas, el 90% de los pacientes se habían recuperado, los síntomas desaparecieron sin dejar secuelas (9)(104).

Cuando se dispuso de información detallada, el síndrome neurológico aparentemente sólo se observó después de la ingesta de grandes cantidades de morillas (más de 100 g por comida), aún si estaban bien cocidas o secas. Intoxicaciones con síntomas principalmente gastrointestinales generalmente se observaron después de la ingesta de morillas crudas o insuficientemente cocidas, aún después de ingerir pequeñas cantidades (104)(107).

Los compuestos tóxicos responsables de los efectos gastrointestinales sin síntomas neurológicos se destruyen o se eliminan al menos parcialmente con la cocción (108). En base a la información disponible, se anticipa que el consumo de morillas secas no da lugar a intoxicaciones (108), pero no siempre es el caso (104)(107).

Todos los síntomas siempre se resuelven en un día (10).

Debe tenerse en cuenta que la morilla es un hongo costoso, que por lo general sólo se consume en pequeñas cantidades. La ingesta es inferior a 50 g de cantidad fresca o menor de hongos secos por comida, pero ocasionalmente puede consumirse en grandes cantidades (alrededor de 200-600 g por comida (105) o como “Varios platos sucesivos o comidas” (104).

La intoxicación por morillas suele ser controvertida pues algunos comensales pueden no tener síntomas, como el caso indicado recientemente (109). Una explicación puede ser que la neurotoxina supuesta sea volátil o inestable o bien que las cantidades presentes en las morillas varíen según las regiones. En los casos de intoxicación, los carpóforos pueden haberse cocinado durante un tiempo demasiado breve para eliminar todo el tóxico y que se hayan consumido grandes cantidades de morillas (105).

Se podría agregar que los consumidores pueden presentar sensibilidad variable hacia los compuestos tóxicos de las morillas.

Toxinas: Las verdaderas morillas o Morchella spp. contienen hemolisinas tóxicas termolábiles (un tipo de proteínas que producen hemólisis; rompen las membranas celulares de eritrocitos, leucocitos y plaquetas). Se dice que las morillas son inofensivas al cocinarlas, ya que las hemolisinas que contienen se alteran o descomponen por acción del calor (~60-80°C) (110) y también se destruyen por desecación.

Por lo tanto, estos hongos no se pueden consumir crudos. Más aún, se recomienda combinar el secado y la cocción, así que si son frescos, primero deben secarse, después rehidratarse (desechando el agua) y a continuación cocinarse unos 30 minutos a una temperatura entre 70 y 90 ºC.

En estudios con micelios de Morilla se han identificado pequeñas cantidades del aminoácido no proteico ergotioneína, 19 mg/kg (peso seco, media de 3 muestras) (111) y hasta 35 mg/kg (peso seco, media de 3 muestras) (112). También se han encontrado pequeñas cantidades de lovastatina (Fig. 12), 8-21 mg/kg (peso seco) en los micelios (112), mientras que Lo et al. (111) identificaron 1440 mg/kg (peso seco, promedio de 3 muestras) de lovastatina. No se sabe si estos compuestos bioactivos también se encuentran en los carpóforos de morillas.

Figura 12
Estructura química de lovastatina

Las estatinas naturales son derivados de hexahidronaftaleno, sustituido con una â-hidroxilactona. Lovastatina es una estatina que se usa como un fármaco contra la hipercolesterolemia para reducir el riesgo de enfermedad cardiovascular. Lovastatina es un compuesto de origen natural que se encuentra en hongos como Pleurotus spp., entre ellos, Pleurotus ostreatus (113). Parece que algunos cultivares de este hongo no producen lovastatina, mientras que otros producen cantidades bastante altas.

En ciertos casos, las estatinas pueden dar lugar a miopatía, caracterizada por debilidad y/o dolor muscular y, en casos muy raros, rabdomiólisis (114)(115). Estos efectos adversos graves no se informaron después del consumo de P. ostreatus.

Por lo general, lovastatina se tolera bien, si bien presenta efectos secundarios, como: aumento de la creatinfosfoquinasa sérica, de las transaminasas séricas, de la fosfatasa alcalina, trastornos gastrointestinales (estreñimiento, flatulencia, dolor abdominal, dispepsia, diarrea, náuseas, vómitos), trastornos musculoesqueléticos (miopatía, mialgia, calambres musculares), trastornos hematológicos (debilidad, anemia), trastornos de la piel y tejido subcutáneo (erupción cutánea, prurito), trastornos del sistema nervioso (cefalea, parestesia, mareos, neuropatía periférica, visión borrosa) (116).

La lactona lovastatina durante los procesos de cocción puede hidrolizarse dando el correspondiente ácido hidroxicarboxílico, la forma activa que disminuye el colesterol.

Lovastatina (Fig. 12) es estable en soluciones acuosas neutras o ácidas a temperatura ambiente, pero el 25% se hidroliza después de una hora de calentamiento a 100 °C. En un estudio térmico y cinético sobre estatinas, se demostró que la lovastatina era estable hasta 190 °C en condiciones libres de solventes (117). En conjunto, es probable que una proporción considerable de lovastatina en el hongo sea estable durante la cocción o posiblemente se hidrolice en cierta medida al ácido hidroxicarboxílico, que es la forma biológicamente activa.

Ergotioneína es un aminoácido natural derivado de histidina que contiene un átomo de azufre en el anillo imidazólico. Esta sustancia es biosintetizada por micobacterias, cianobacterias y hongos filamentosos, así como muchos hongos comestibles, como: carpóforos de Lepista nuda, carpóforos secos de especies comestibles de Pleurotus, “Shiitake” (Lentinula edodes) y hongos botón (Agaricus bisporus) (111)(112). En general, ergotioneína (Fig. 13) se ha encontrado en cantidades algo menores en otros hongos comestibles (111)(112). Considerando que el procesamiento de alimentos destruye algunos componentes bioactivos, una proporción considerable de la ergotioneína permanece sin cambios (118).

Figura 13
Estructura química de ergotioneína

Se ha demostrado en numerosos estudios in vitro y algunos in vivo que ergotioneína tiene propiedades antioxidantes y citoprotectoras en los hongos frente a una amplia gama de factores estresantes celulares (119) y puede participar en el transporte de iones metálicos y en la regulación de las metaloenzimas.

Aunque no puede ser sintetizada por las células humanas, ergotioneína (Fig. 13) es absorbida a través de la dieta y se acumula en tejidos específicos a través del transportador de ergotioneína altamente específico, ETT (del inglés ergothioneine transporter), también conocido como OCTN1 (símbolo del gen: SLC22A4), para entrar en las células (119)(120). La expresión de ETT se ha confirmado en líneas celulares humanas y de animales y su transporte funcional de ergotioneína se ha observado en estudios preliminares in vivo (121). En los humanos, ergotioneína se adquiere exclusivamente a través de la dieta y se acumula en eritrocitos, médula ósea, hígado, riñones, líquido seminal y ojos (120) y también está presente en la piel (119).

Sin embargo, el rol fisiológico de ergotioneína no está determinado y la consecuencia de la deficiencia de ergotioneína no está clara (120). El transportador de ergotioneína ha sido sugerido como un posible factor en las enfermedades autoinmunes artritis reumatoidea y la enfermedad de Crohn, y los pacientes con artritis reumatoidea tienen altos niveles de ergotioneína (120). No se han relacionado efectos adversos ni siquiera con una ingesta elevada del compuesto.

El Panel sobre Productos Dietéticos para la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria considera que los límites diarios seguros de 2,82 mg/kg de peso corporal para infantes, 3,39 mg/kg para niños pequeños y 1,31 mg/kg para adultos, incluidas mujeres embarazadas y en lactancia (122).

Mecanismo de acción: No se conoce el mecanismo de acción de las posibles hemolisinas tóxicas, ni si existen otras toxinas que contribuyan al cuadro sintomatológico. Se debería verificar si lovastatina es activa en la intoxicación. El cerebelo es una parte del sistema nervioso que participa activamente en el tono muscular, el equilibrio, la fuerza y la trayectoria de los movimientos, así como en el habla. Sin que la intoxicación afecte a órganos vitales, el cuadro producido por estos hongos puede ser bastante invalidante.

Análisis filogenéticos moleculares del género Morchella: El género Morchella pertenece a la familia Morchellaceae (Orden: Pezizales). Se han encontrado representantes de esta familia en Europa (123), en Asia (123)(124), Medio Oriente (125), Australia (126), en América del Norte y Centro América [Canadá (127), Estados Unidos (127), México, Costa Rica y Guatemala (128)] y América del Sur [Perú (128), Venezuela (128), Colombia (128), Argentina (129), Chile (129) y Brasil (130)].

La identificación de las especies del género Morchella es muy problemática debido a la considerable diversidad morfológica intraespecífica y a la carencia de caracteres diagnósticos. Más aún, la identificación basada en fenotipos a nivel de especie sigue siendo inadecuada debido a sus ciclos de vida complejos, a las diferencias menores y a la plasticidad de las características morfológicas entre las especies (103)(131), siendo microscópicamente similares (125). Además, existe falta de acuerdo entre los nombres científicos y comunes.

Es por eso que se han realizado estudios moleculares. El nivel de especie es ampliamente discutido, dado el alto polimorfismo. Así, autores franceses estudiaron el polimorfismo del ADN en M. esculenta y M. conica determinando las secuencias completas del espaciador transcripto interno (ITS: internal transcribed spacer) de los genes que codifican ARNr en ambas especies para dilucidar la discrepancia de longitud del ITS entre ambas especies. También determinaron la diversidad de ITS de ADNr en las morillas (132).

El ARN ribosómico 28S (ARNr 28S) es el principal ARNr estructural que constituye la gran subunidad 60S de los ribosomas de los eucariotas. Es una ribozima con actividad de peptidil-transferasa que permite la formación de enlaces peptídicos entre dos aminoácidos durante la proteogénesis. Los genes que codifican este ARNr 28S se denominan “ADNr 28S”. La comparación de las secuencias de estos genes se usa a veces en análisis molecular para construir árboles filogenéticos de algunas especies, por ejemplo, en hongos.

Se efectuó la resolución filogenética de Morchella, Verpa y Disciotis (géneros presentes en la familia Morchellaceae (133) en base al análisis de enzimas de restricción del gen ADNr 28S. En algunos casos, se observó una mayor variación genética intraespecífica que entre las especies putativas.

Los avances de los últimos años en estudios filogenéticos han contribuido al conocimiento taxonómico y de las relaciones biogeográficas del género Morchella (124)(127)(131)(133). Así, estos estudios filogenéticos del género Morchella (103)(134) demuestran la existencia de 67 especies, que se organizan en los clados Esculenta, Elata . Rufobrunnea (133).

Hace unos pocos años (131) se hizo una revisión de la nomenclatura de especies del género Morchella de Europa y América del Norte en base a análisis filogenéticos moleculares. Se establecieron así relaciones evolutivas inferidas a partir de datos de multilocus y una taxonomía unificada. Los resultados revelaron que el número de especies de Morchella en Europa (n=21) es casi idéntico al de América del Norte (n=22), pero sólo se encontraron siete especies en ambos continentes. Esto está de acuerdo con los informes previos de alto endemismo continental dentro del género. Como contribución a la taxonomía, se identificó un nuevo subclado que incluye holotipos de M. castanea y M. brunneorosea en la sección Morchella (Clado Esculenta). Los lectotipos para Morchella deliciosa, M. eximia . M. tridentina se designaron en este trabajo, así como los epitipos para M. dunalii, M. eximia, M. purpurascens y M. vulgaris. Se determinó que Morchella conica es ilegítima, y se requiere más investigación para determinar la identidad de M. elata y M. inamoena (131).

En la Patagonia argentina, las morillas están asociadas con bosques nativos de Austrocedrus chilensis (“ciprés de la Cordillera”) y Nothofagus antarctica (“ñire”) y varias coníferas exóticas que fueron introducidas desde el oeste de América del Norte. Pildain et al. (135) han contribuido al conocimiento de su taxonomía y sus relaciones filogenéticas con otras especies del género. Las secuencias de ADN se obtuvieron de la región ITS del ADNr (ITS1, 5.8S e ITS2) y se utilizaron en análisis filogenéticos.

Se llevó a cabo la identificación de colecciones de Morchella de la Patagonia y sus relaciones filogenéticas con otras especies del hemisferio norte. La comparación se realizó mediante el análisis de secuencias de ADN obtenidas de cuatro loci (135).

Los análisis de conjuntos de datos individuales y combinados revelaron que las morillas Patagónicas pertenecen al Clado Elata (“Morillas negras”) y comprenden tres linajes a nivel de especie fuertemente sustentados tanto del bosque nativo Patagónico como de árboles exóticos introducidos desde el oeste de América del Norte. Un linaje se identificó como especie filogenética Morchella frustrata (Mel-2), que se conoce de EE. UU. y Canadá. El segundo linaje, que parecía ser “adaptado al fuego”, se identificó como la especie filogenética Morchella septimelata (Mel-7), que también se conoce en Estados Unidos. Esta especie fue recolectada de bosques nativos quemados, compuestos principalmente de A. chilensis y N. antarctica, pero también de Pseudotsuga menziesii (Mirb.) Blanco, que es nativa del oeste de América del Norte. Los análisis filogenéticos sugirieron que la tercera especie de la Patagonia estaba anidada dentro del Subclado Elata, rico en especies, y representa un nuevo linaje a nivel de especie (designado informalmente Mel-37) dentro del Clado Elata. Las colecciones actuales de la Patagonia constituyen la latitud más meridional, en la cual se haya informado Morchella hasta la fecha. La identificación de dos morillas de Argentina como taxones norteamericanos es, por lo tanto, un patrón biogeográfico notable. En vista de la hipótesis de que el Clado Elata se originó en el oeste de América del Norte, los autores especularon que al menos dos de los linajes colonizaron América del Sur desde América del Norte a través de la dispersión a larga distancia, migración o, más probablemente, fueron introducidos con especies de árboles exóticos (135).

Especies causantes del micetismo: Varias especies del género Morchella. División: Ascomycota; Clase: Pezizomycetes; Orden: Pezizales; Familia: Morchellaceae. Morchella vulgaris. Morchella conica Pers. (M. elata Fr.) (“morilla negra”) y Morchella esculenta (L.) Pers. (“morilla”) son morillas comestibles. Estas dos últimas especies, según estudios moleculares se pueden dividir en varias especies más, que no se pueden distinguir morfológicamente (133). Es por eso que se han abordado estudios genéticos.

Morchella esculenta crece en Argentina, en la Patagonia, en la zona andina, al oeste de las provincias de Neuquén, Río Negro y Chubut; también en el sur de Chile. Esta especie es denominada “hongo del ciprés” porque crece debajo del ciprés, un árbol autóctono de la Patagonia andina argentina. Estos hongos se cosechan una vez al año, en los meses de setiembre y octubre, por lo cual se comercializan generalmente deshidratados. Se consumen en la zona y se exportan. Tienen delicado y exquisito sabor, con un muy buen aroma.

Se observaron casos que afectaron al SNC por ingestión de dos especies diferentes de carpóforos: Hapalopilus rutilans en Alemania y Pleurocybella porrigens en Japón (76), con diferencias en el tiempo de latencia que es muy corto en el último caso.

Hapalopilus rutilans (también conocido como H. nidulans) es una especie de hongo políporo de la familia Polyporaceae, que se encuentra ampliamente distribuida en los cinco continentes. Crece en la madera muerta, caída o en pie, de árboles de hoja caduca, en la que fructifica sólo, en grupos, fusionados o superpuestos. Los carpóforos de H. rutilans son neurotóxicos si se ingieren, según los casos registrados en Alemania de un adulto y dos niños, en 1986 (76)(136) y dos casos en 2013 con síntomas similares y recuperación, debido a la ingestión del hongo por confundirlo con Fistulina hepatica comestible (137).

El conjunto de síntomas derivados del consumo de H. rutilans se ha denominado síndrome neurotóxico tardío (138).

Período de latencia: La incubación es de unas 12 horas después de la ingestión del hongo (76).

Sintomatología: Los primeros síntomas corresponden a trastornos gastrointestinales con náuseas y repetidos vómitos acompañados de dolor abdominal. Varias horas más tarde, aparecen trastornos hepatorrenales (leve aumento de alanina-aminotransferasa y creatinina sérica) y síntomas neurológicos centrales (vértigo, ataxia, somnolencia, discapacidad visual). Los síntomas disminuyen en unos pocos días. En el caso que se mencionara de intoxicación en Alemania de un hombre y dos niños intoxicados se observaron los síntomas indicados. Se registró actividad lábil en el electroencefalograma, así como signos difusos inespecíficos y signos compatibles con edema cerebral. Estos resultados se obtuvieron aún después de 3 semanas. El crecimiento de los niños no pareció afectarse.

Además, la orina del adulto y de los dos niños intoxicados se volvió púrpura-violeta temporariamente. Por lo tanto, la coloración púrpura de la orina después de la ingestión de un hongo polipórico es muy sugerente de intoxicación por H. rutilans (76).

Se recuperaron completamente una semana después (136).

En dos casos más recientes (137), un padre y su hija de 13 años recolectaron carpóforos identificados como los del hongo comestible Fistulina hepatica y comieron una cantidad desconocida. A las 12 horas después de la ingestión, ambos sujetos se quejaron de dolor abdominal, luego náuseas, vómitos, anorexia, astenia, diplopía y visión borrosa. El padre también tuvo alucinaciones visuales. A los 2 días después de la ingestión, el examen clínico mostró nistagmo multidireccional. El padre también tuvo trastornos de equilibrio y ambos intoxicados emitieron orina púrpura. Las pruebas de laboratorio mostraron niveles elevados de creatinina sérica y urea en sangre, proteinuria y leucocituria en ambos pacientes y aumento leve de las enzimas hepáticas en el padre. El color de la orina volvió a la normalidad a los 2 días y a los 7 días después de la ingestión en la niña y su padre respectivamente. La recuperación clínica y bioquímica completa se obtuvo dentro de una semana en ambos casos (137). Los signos y síntomas resultaron similares a los reportados previamente.

Toxina: La toxina es el ácido polipórico (2,5-difenil- 3,6-dihidroxi-1,4-benzoquinona) (Fig. 14), que es un compuesto de p-terfenilo de benzoquinona, identificado y designado por primera vez a partir de un cultivo micelial de esta especie en 1877 (139). Su estructura fue dilucidada en 1926 y confirmada por cristalografía en 2001 (140).

Figura 14
Estructura química del ácido polipórico

Este compuesto químico está presente en un 20-40% del peso seco de los carpóforos. Se encuentra en otros hongos, pero en cantidades mucho más bajas.

Se conocen compuestos químicos basados en el núcleo de p-terfenilo, que muestran estructuras inusuales y propiedades biológicas interesantes; se encuentran esencialmente en hongos y líquenes. Estos compuestos y, en particular, los polihidroxi-p-terfenilos completamente aromáticos, presentan actividad citotóxica contra células tumorales y otras propiedades antiproliferativas, actividad antibacteriana, antioxidante o actividad de captación de radicales, actividad antiinflamatoria y otras propiedades de interés biomédico o agronómico (139).

La administración oral de ácido polipórico en ratas permitió la reproducción de los signos relacionados con la ingestión de H. rutilans en humanos: las ratas desarrollaron alteraciones conductuales, disminución de la actividad motora y de la respuesta de colocación visual, insuficiencia hepatorrenal, acidosis metabólica, hipocalemia e hipocalcemia; también se obtuvieron análogos análisis de laboratorio. Así se evidenció que el ácido polipórico es la principal toxina en H. rutilans (136). La citotoxicidad se estableció en modelos de cultivo de neuronas de ratas (136).

Mecanismo de acción: El ácido polipórico inhibe a la enzima dihidroorotato-deshidrogenasa (136) y tiene cierta actividad antifúngica y antibacteriana (141). Se ha demostrado que es un intermediario en la biosíntesis de alantofuranona, un antibiótico gamma-lactona del hongo Allantophomopsis lycopodina (142).

Especies causantes del micetismo: División: Basidiomycota; Clase: Agaricomycetes; Orden: Polyporales: Familia: Polyporaceae. Hapalopilus rutilans = Hapalopilus nidulans.