La recolección de la corteza de Pala scholaris (L.) Roberty, también conocida como Alstonia scholaris (L.) R.Br., se realizó en el municipio de Puerto Colombia, Departamento del Atlántico, de la Costa Norte Colombiana, en marzo de 2014 (25°C, H.R. 70% y tiempo seco), sin presencia de partes dañadas o deterioradas por insectos, aproximadamente 650 g del órgano vegetal. A un espécimen completo de la planta se le realizó la identificación taxonómica en el Herbario Nacional Colombiano del Instituto de Ciencias Naturales de la Universidad Nacional de Colombia, sede Bogotá y registró con el código COL 576296.

El material vegetal fue expuesto a secado a temperatura ambiente entre 29 ± 1°C, bajo sombra por 15 días. Posteriormente, fue llevado a un tamaño de partícula moderadamente grueso por molienda y sometido a extracción con dos mezclas en relación etanol/agua 1:1 y 7:3 por maceración por 8 días. Concluido el tiempo, se filtraron y concentraron en un rotaevaporador a 40°C y 80 rpm, obteniendo dos extractos hidroalcohólicos obtenidos bajo las mismas condiciones de extracción. Los extractos se almacenaron a 20 °C y protegidos de la luz durante el periodo de estudio ¹².

Para los controles de calidad se evaluó las características organolépticas (olor y color), densidad, pH, sólidos totales y rendimiento, según las metodologías descritas por Ochoa (2013) ¹³. Mientras, para determinar la presencia de los grupos químicos mayoritarios de los extractos hidroaocohólicos de la corteza de Pala scholaris, se utilizó diversas pruebas y reactivos específicos para identificar la presencia de flavonoides, alcaloides, taninos, antraquinonas, fenoles, glicósidos cardiotónicos, saponinas, leucoantocianinas, esteroles y terpenos ¹⁴.

Las larvas de Aedes aegypti cepa Rockefeller se colectaron en la zona residencial del municipio de Barranquilla (Atlántico), a partir de reservas de agua potable, las cuales se trasladaron al Laboratorio de Salud Pública del Atlántico, donde se realizó su identificación y se obtuvieron huevos de la siguiente generación del vector. Posteriormente, se trasladaron al laboratorio para la formación del estado larvario de Aedes aegypti sumergidos en agua para inducir la eclosión, las larvas que emergieron se transfirieron a agua limpia para la alimentación de las mismas, se criaron hasta el III estadio ¹⁵, se seleccionaron las larvas necesarias para efectuar el ensayo biológico, bajo condiciones adecuadas de 29 ± 1°C y humedad relativa (72 ± 4%).

A partir del extracto seco, se realizaron concentraciones sucesivas de 1000, 500, 250, 150 y 100 ppm; se colocaron 20 larvas Aedes aegypti en envases de 100 mL de cada concentración según lo establecido por el protocolo de la OMS ¹⁶. Cada ensayo se realizó por triplicado. Como control positivo se usó temefos (fosforotionato de o,o,o,o'-tetrametil-o,o'-tio-di-p-fenileno)a 0,05 mg/L y como control negativo se empleó agua destilada ¹⁷. Las lecturas de mortalidad larvaria, se realizaron a las 1, 3, 6, 12, 24 y 36 h de exposición. Para el registro de las larvas que se declaraban muertas, se tenía en cuenta aquellas que no presentaban movimiento al contacto físico en el mesotórax ¹⁵.

Se registraron y procesaron los datos cuantitativos del control de calidad expresados en promedio ± desviación estándar, mientras en el caso de la acción larvicida se procesó la mortalidad para calcular el porcentajes de mortalidad presentado por las concentraciones evaluadas; adicional, utilizando un análisis Probit del paquete estadístico Statgraphics Centurion XVI, se calculó los valores para CL₅₀ con sus respectivos límites de confianza al 95% ¹⁸.

Para el cálculo de los porcentajes de mortalidad se utilizaron las fórmulas que aparecen a continuación (Formula 1):

Tabla 1

Tabla 1.
Relación de metabolitos secundarios identificados en los extractos hidroalcohólicos de corteza de Pala scholaris.

( - ): no identificado, ( + ): escaso, ( ++ ): moderado, ( +++ ): abundante.

De acuerdo con los resultados de la identificación de constituyentes mayoritarios, se evidenció la presencia de alcaloides, lo cual es soportado por las investigaciones de Salim (2004), donde informan el aislamiento e identificación de cinco alcaloides a partir de un extracto etanólico de corteza de P. Scholaris ¹⁹, esto coincide con las afirmaciones de Khyade (2014), donde se indica que estos metabolitos son los principales componentes de esta especie y han sido reportados en todos los órganos de la planta, siendo las hojas donde se encuentran con mayor abundancia ²⁰; también se identificaron fenoles, flavonoides, leucoantocianinas, saponinas, triterpenos en ambos extractos, la presencia estos constituyentes coincide con lo reportado por Khyade (2006) y Khyade-Vaikos (2010), en sus investigaciones en hojas y corteza de P. scholaris _^21-22) (Tabla 2).

Tabla 2.
Resultados promedios de los controles de calidad de los extractos

* Valores por triplicado

Los ensayos de control de calidad de los extractos hidroalcohólicos permitieron diferenciar los extractos, teniendo en cuenta las características evaluadas, ambos extractos fueron homogéneos, presentaron un olor característico a madera-resina, color marrón, pero la intensidad del color fue diferente, debido a que el extracto hidroalcohólico de proporción 7:3, presentó una tonalidad oscura, esto se debe a que contiene una menor proporción de agua, que el extracto con proporción 1:1; estos resultados permiten establecer criterios de identificación de los extractos elaborados, teniendo en cuenta las diferencias encontradas; en relación con la densidad, el extracto con proporción 1:1 presentó un valor más alto, soportado por el aumento de la constante dieléctrica, lo cual permitió un mayor arrastre de sustancias ²³, este parámetro proporciona información acerca de la composición de los extractos evaluados, indicando que el extracto que presentó una mayor densidad, contiene mayor proporción de constituyentes polares y el extracto de proporción 7:3 contiene mayoritariamente sustancias menos polares, lo cual coincide con los resultados obtenidos en la marcha fitoquímica, donde este extracto presentó mayor cantidad de terpenos; esto se encuentra directamente relacionado con la cantidad de sólidos totales, que indican la cantidad de sustancias suspendidas en el extracto, este parámetro es muy variable porque depende muchos factores ²⁴, el extracto hidroalcohólico de proporción 1:1 presentó una mayor concentración de sustancias, en relación con el extracto hidroalcohólico de proporción 7:3 (Tabla 3)

Tabla 3.
Porcentaje de mortalidad de los extractos hidroalcohólicos de corteza de Pala scholaris.

* Valores por triplicado

Al analizar los resultados del porcentaje de mortalidad de los extractos hidroalcohólicos a diferentes concentraciones con el factor tiempo de contacto, se pudo establecer ambos extractos presentan comportamientos similares, el extracto hidroalcohólico de proporción 1:1 presentó un porcentaje de mortalidad de 100% a partir de las 12 horas a concentración de 1000 ppm; por otra parte, el extracto hidroalcohólico de proporción 7:3 a concentración de 500 ppm presentó un porcentaje de mortalidad a las 36 horas de exposición del 60% de las larvas y a concentración de 1000 ppm, a partir de las 12 horas un porcentaje de mortalidad de 100%, por lo que este resultado resulta muy prometedor, teniendo en cuenta los resultados obtenidos para el control positivo, el insecticida larvario temefos, donde se observa un comportamiento muy parecido al de los extractos, con un porcentaje de mortalidad a las 12 horas de 100%, estos resultados se encuentran acorde a uno de los propósitos planteados por la Organización Mundial de la Salud, donde se promueve la investigación para el control vectorial, debido al fenómeno de resistencia hacia los insecticidas sintéticos_^25-26) (Tabla 4).

Tabla 4.
Concentraciones letales 50 de los extractos hidroalcohólicos de corteza de Pala scholaris a 24 h de evaluación

El extracto hidroalcohólico de corteza P. Scholaris a una concentración de 1000 ppm, con una proporción 1:1 obtuvo una CL₅₀ (mg/L) de 475,42 y el extracto de corteza P. Scholaris a una concentración de 1000 ppm, con una proporción 7:3 una CL₅₀ (mg/L) de 403,55, en la literatura se ha reportado que la actividad larvicida se debe principalmente a la presencia de monoterpenos, los cuales han demostrado actividad larvicida en diferentes especies de mosquitos; esto coincide con la presencia de estos constituyentes en los extractos evaluados, se ha descrito que la acción de los compuestos larvicidas se debe principalmente a la absorción por al tracto respiratorio o la ingestión de estos compuestos que al entrar en contacto con la larva causan un efecto generalizado, ocasionando la muerte²⁷, este efecto depende de la concentración y el tiempo de exposición, como se observó en los resultados obtenidos.

^* Autor para correspondencia. 31. Correo electrónico: oscarivancamacho@gmail.com (Oscar Ivan Camacho-Romero).