AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTI-INFLAMATÓRIA TÓPICA E ANTIBACTERIANA DO EXTRATO METANÓLICO DAS FOLHAS DE Sideroxylon obtusifolium

Evaluation of the Topical Anti-inflammatory Activity and Antibacterial Activity of Methanol Extract in the Sideroxylon obtusifolium Leaves

Evaluación de la actividad antiedematogenic tópica y antibacteriana del extracto metanólico de hojas de Sideroxylon obtusifolium

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Citation / Citar este artículo como: Aquino P, Gomes Figueredo F, Pereira N, Nascimento E, Martin A, Veras H, Oliveira C, Ferreira S, Leandro L, Silva M, Menezes I. Avaliação da atividade anti-inflamatória tópica e antibacteriana do extrato metanólico das folhas de Sideroxylon obtusifolium . Acta biol. Colomb. 2016;21(1):131-140. doi: http://dx.doi.org/10.15446/abc.v21n1.48170

O uso de plantas para fins medicinais é uma prática antiga, com registro desde épocas milenares (Veiga-Júnior, 2008). No Brasil, mesmo com o avanço da indústria farmacêutica, muitos habitantes (principalmente da área rural), ainda se utiliza das plantas, empregando-as para o alivio ou cura de algumas enfermidades (Badke et al., 2011).

As plantas produzem substâncias conhecidas como princípios ativos, que são compostos químicos originados durante o seu metabolismo, e são capazes de provocar algum tipo de atividade biológica quando introduzidos por qualquer via no organismo animal, inclusive no homem (Boscolo e Valle, 2008).

Sideroxylon obtusifolium (Roem. & Schult.) conhecida como quixabeira, é uma espécie da flora da caatinga (Pedrosa et al., 2012). As folhas e principalmente as cascas são usadas geralmente na forma de chás, na terapia popular para vários fins terapêuticos como adstringente tônica, antiinflamatória, tratamento de úlcera duodenal, gastrite, azia, lesão genital, cólicas, problemas renais e problemas cardíacos. Estudos farmacológicos comprovam a ação hipoglicemiante e ação contra micro-organismos, fazendo com que S. obtusifolium seja considerada uma espécie importante no uso da terapia tradicional (Agra et al., 2007; Beltrão et al., 2008; Araújo-Neto et al., 2010; Pedrosa et al., 2012; Leandro et al., 2013).

As pesquisas sobre esta planta ainda são escassas, principalmente em relação ao estudo das folhas, por isso há um interesse de buscar os compostos presentes nesta parte da planta e comprovar por meio de modelos experimentais, o uso desta para diversos fins na medicina popular. Com isso, o presente trabalho teve por objetivo investigar a atividade anti-inflamatória tópica e antibacteriana do extrato metanólico obtido das folhas de S. obtusifolium , bem como fazer uma triagem dos componentes químicos presentes nesta parte da planta.

Os resultados mostraram elevada quantidade de fenóis totais presentes nas folhas S. obtusifolium . Os fenóis totais constituem grupos bastante heterogêneos, e proteger plantas contra fatores externos é uma das suas principais atividades. Estes compostos podem reduzir o risco de várias doenças (Pereira et al., 2009), devido a seu poder antioxidante principalmente por inibirem a peroxidação lipídica e a lipooxigenase (Soares, 2002). Essas informações são úteis para correlacionar esta atividade a atividade antiinflamatória, visto que já é comprovado na literatura que extratos vegetais ricos em metabólitos secundários reduzem inflamações por eliminar superóxidos que participam da cascata da inflamação (Desmarchelier et al., 1999; Vatten e Shett, 2005).

Os flavonóides formam um grupo muito diversificado entre os produtos de origem natural, são metabólitos polifenólicos secundários com atividades biológicas muito diversas, sendo cada vez mais explorados na indústria farmacêutica (Simões et al., 2004; Werz, 2007). Semelhante a este estudo, Silva (2008) evidenciou compostos flavonóides na casca e folha de S. obtusifolium , e um estudo realizado por Araújo-Neto (2010) revelou quantidades altas de flavonóides em frações derivados do extrato etanólico da casca de S. obtusifolium .

Nos testes da atividade moduladora foram evidenciados efeitos sinérgicos e antagônicos, diferindo dos resultados de um trabalho anterior do nosso grupo, no qual analisou-se o extrato metanólico e hexânico da casca de S. obtusifolium para atividade antibacteriana. Neste trabalho o extrato metanólico não apresentou grau de modulação clinicamente relevante para Escherichia coli e Staphylococcus aureus , mostrando efeito somente para cepas de Pseudomonas aeruginosa , quando combinado com amicacina. (Leandro et al., 2013). Os diferentes metabólitos presentes em ambas as partes podem ter influenciado nestes resultados (Silva, 2008; Araújo-Neto et al., 2010).

As bactérias Gram-negativas apresentam múltiplos mecanismos de resistência a várias classes de antibióticos. Linhagens multirresistentes expressam enzimas capazes de provocar alterações na estrutura do antibiótico fazendo-o perder a sua funcionalidade através de reações como a acetilação, poliadenilação e fosforilação. Mecanismos como bomba de efluxo expulsa o antibiótico do o espaço periplasmático, impedindo-o que atinja o seu local de ação. As porinas, presentes na membrana plasmática das bactérias, são proteínas que formam canais com água; rege a entrada de alguns elementos, incluindo antibióticos, mudanças na conformação pode levar a membrana externa não permite a passagem de esses agentes para o espaço periplásmico (Tafur et al., 2008).

Os antagonismos observados entre os antibióticos e os compostos do EMSO podem ser associados a fatores como a quelação do antibiótico ou de ligação dos compostos a locais específicos dos antibióticos, desse modo reduzindo o seu espectro de atividade. Isto indica que o antagonismo é devido a um efeito sinérgico multi-alvo, pois os constituintes de um extrato podem afetar a atividade destes antibióticos interferindo com vários alvos, cooperando em um efeito antagônico ou sinérgico (Wagner e Ulrich-Merzenich, 2009).

É conhecida a ação sinérgica de produtos naturais junto a antimicrobianos normalmente utilizados no tratamento terapêutico, determinando uma diminuição na sua CIM. Os metabólitos presentes no EMSO bem como em outros extratos dos produtos naturais podem aumentar a absorção de antibióticos devido ao aumento da permeabilidade da membrana celular, bem como causar interferência no funcionamento das enzimas bacterianas. Este método está associado ao uso de drogas e plantas, utilizando uma abordagem com uma ou várias combinações de extratos, que podem atingir não apenas um único alvo, mas vários ao mesmo tempo, os diferentes componentes terapêuticos cooperam de uma forma sinérgica (Wagner e Ulrich- Merzenich, 2009; Coutinho et al., 2010; Matias et al., 2010; Figueredo et al., 2013).

Flavonóides são eficazes contra micro-organismos, podem tanto formar complexos de proteínas solúveis que se aderem à parede celular bacteriana como também causar ruptura da membrana plasmática de micro-organismos. Além disso, alguns estudos têm demonstrado sinergismo entre antibióticos convencionais e flavonóides contra cepas bacterianas resistentes (Tsuchiya et al., 1996; Cushnie e Lamb, 2005).

Os antibióticos da classe dos aminoglicosídeos são parte importante da terapia antibacteriana desde seu descobrimento, na década de 40. Ao se ligarem ao ribossomo bacteriano todos os aminoglicosídeos atuam exercendo seu efeito bactericida pelo mesmo mecanismo da ação, impedindo a síntese de proteínas. Portanto, torna-se necessário a penetração no interior da célula bacteriana para que possam exercer seu mecanismo de ação. Para que isto ocorra é necessário que o aminoglicosídeo interaja com a superfície celular, seja transportado por meio da membrana e por fim realize o acoplamento com o ribossomo (Oliveira et al., 2006).

A toxicidade celular é comum para todos muitos antibióticos da classe dos aminoglicosídeos. A nefrotoxicidade e a ototoxicidade são efeitos tóxicos frequentes dos aminoglicosídeos (Oliveira et al., 2006; Rang et al., 2007). A combinação dos extratos com os aminoglicosídeos pode ser uma alternativa para minimizar os efeitos colaterais dessa classe uma vez que associação acarreta em um efeito sinérgico reduzindo significativamente a CIM destas drogas, diminuindo a dose necessária para que haja sucesso terapêutico (Figueredo et al., 2013).

Modelos de indução de inflamação pelos agentes químicos presentes neste trabalho são muito úteis para verificar o potencial de muitos produtos aplicados por via tópica, além de elucidar propriedades terapêuticas das mesmas nos processos inflamatórios cutâneos devido à aplicação das substâncias diretamente no foco inflamatório (Vane e Warner, 2000).

O agente irritante óleo de cróton, extraído das sementes de Croton tiglium , possui como seu maior constituinte o 13-acetato de 12-o-tetracanoilforbol (TPA) sendo utilizado em modelos empregados para avaliar a resposta inflamatória, uma vez que este agente induz inflamação cutânea e hiperproliferação celular, assemelhando-se a doenças de pele, como a psoríase. Estudos confirmaram que a inflamação aguda induzida por a administração tópica a partir de óleo de cróton aumenta à permeabilidade vascular, causa vasodilatação pela liberação de histamina, estimulando a migração de neutrófilos e macrófagos (Tubaro et al., 1985; De Young et al., 1989).

Os ésteres de forbol como o TPA ativam a cascata de inflamação do ácido araquidônico, por meio da cicloxigenase e lipoxigenase (COX-2 / LOX). A ativação da via da MAPK pela proteína quinase C, promove a ativação de alguns fatores de transcrição nuclear, como o NF-κB e a AP-1, os quais têm um papel central na regulação de diversas proteínas pró-inflamatórias, tais como algumas citocinas (IL-1, IL-2, IL-6, IL-8, TNF-α), enzimas pró-inflamatórias, como COX-2 e iNOS, e moléculas de adesão (Pungeró et al., 1998; Chi et al., 2003; Murakawa et al., 2006; Badilla et al., 2007; Ferreira et al., 2010).

Um modelo animal de inflamação tópica é o edema de orelha induzido pela aplicação tópica do fenol que tem semelhança à dermatite de contato que acontece em humanos, sendo um bom modelo para ser usado com o intuito de simulação da mesma (Lim et al., 2004).

Este modelo induz formação de um intenso edema após 1hora de aplicação do agente flogistico. Os mecanismos que explicam a irritação da pele causada pelo fenol seriam o rompimento por efeito direto da membrana plasmática dos queratinócitos, liberando a IL-1α pré-formada, IL-8, TNF-α, mediadores inflamatórios como os metabólitos do ácido araquidônico e de radicais livres. O fenol difere do óleo de cróton, pois este induz as citocinas inflamatórias envolvendo fatores de transcrição nuclear através de vias que dependem da proteína quinase C. Porém, apesar da inflamação ser desencadeada por vias diferentes, ambos os modelos, compartilham do envolvimento dos metabólitos do Ácido araquidônico e espécies reativas de oxigênio, na resposta inflamatória instalada (Wilmer et al., 1994).

Araújo-Neto et al. (2010) demonstraram a atividade anti-inflamatória da entrecasca do extrato etanólico de S. obtusifolium utilizando o modelo de edema de pata induzido pela carragenina, muito usado para triagem de compostos com potêncial atividade anti-inflamatória. Foi verificada potêncial efeito anti-inflamatório desta planta, condizendo com os resultados mostrados neste trabalho.

A triagem química do EMSO mostrou-se rica em flavonoides; vários estudos demonstraram que essa classe age na diminuição da permeabilidade capilar, inibindo a infiltração de leucócitos e nos estágios iniciais do processo inflamatório. Podem atuar inibindo a proliferação de linfócitos e a produção de citocinas como a TNF- α e IL-1 (Biesalski, 2007).

Flavonoides como a santina e ermanina inibiram o desenvolvimento de edema de orelha induzido por PMA em camundongos. Em uma hora de exposição, santina inibiu a inflamação em 80,5 %, ermanina em 95,1 %. (Abad et al., 1995).

Diversos Flavonoides podem interagir na COX, LOX e fosfolipase A₂, além de modularem a enzima formadora de óxido nítrico (NO) (Cazarolli et al., 2008; Lopez et al., 2008), o que pode justificar o efeito redutor de edema observado nos resultados deste trabalho.

O estudo revelou o potencial terapêutico do extrato metanólico das folhas de Sideroxylon obtusifolium , demonstrando ter ação moduladora da atividade antibacteriana, possível atividade antioxidante e antiinflamatória. Fato este, devido aos metabólitos presentes com reconhecida atividade biológica. No entanto pesquisas adicionais precisam ser realizadas com intuito de verificar as substâncias isoladas presentes no extrato que apresentam estas atividades, servindo esta pesquisa como parâmetro para futuros estudos relacionado à espécie supracitada.

Associate Editor: Francisco José Martínez Pérez.

Agradecemos a colaboração e esforço de todos os autores, a Faculdade Leão Sampaio e a Universidade Regional do Cariri que deram apoio e fomento para realização deste trabalho.