Para el estudio estadístico de los resultados se empleó el programa SPSS V.20 (IBM Corp. Released, 2012) para Windows [28]. Se realizaron los correspondientes Análisis de Varianza de una Vía (ANOVAS), considerando diferencias significativas entre los grupos de estudio analizados aquellas cuyo valor de P ≤ 0,05. Se aplicó el test de Newman-Keuls para estudiar los efectos de cada una de las variables continuas y la prueba de Ji-cuadrado para el análisis de variables discontinuas.

El pH del rumen es un parámetro fisicoquímico esencial en la fisiología de la digestión de los rumiantes [43] cuyos valores pueden fluctuar considerablemente en un rango de 5,5 a 7,2 [38]. En el presente estudio los valores del pH ruminal de los animales cebados mediante el sistema R. M. (5,96 ± 0,43) fue significativamente inferior (P < 0,05) a la encontrada en los individuos alimentados con el sistema C. M. (6,29 ± 0,43), apreciando un valor medio 6.09 ± 0.49, que se encuadraría dentro del rango de pH señalado en la bibliografía [3, 24], indicativo del padecimiento de una acidosis ruminal crónica (6,2 – 5,6), siendo similar al señalado por García y col. [21] para la misma raza (pH=6,2).

A medida que aumenta en la ración la proporción de carbohidratos fácilmente fermentables se incrementa, también, la producción de AGVs, disminuye el tiempo de rumia y la producción de saliva de los animales, lo que se traduce en una reducción del pH ruminal [36, 38]. Por ello, se esperaba encontrar un pH mayor en los animales que siguen una dieta más rica en fibra, esto es con el sistema R. M. pero, por el contrario, se observó un pH significativamente menor, más ácido, en los animales alimentados mediante este sistema. Ello hace pensar que existen otros factores añadidos que pueden influir en la materialización definitiva de los valores del pH del rumen, tales como la interacción entre ácidos, bases y sustancias tamponantes del sistema digestivo [39], el balance entre la producción de ácidos y aquellos procesos que eliminan o neutralizan los mismos [2], la calidad de la ración aportada, la frecuencia de administración del alimento, la eventual adición de sustancias tampón y la cantidad de alimento ingerida por el animal [31, 43].

La saliva es el principal sistema amortiguador del pH ruminal. Su secreción se activa durante la masticación y la rumia dependiendo de la cantidad y longitud de la fibra aportada con la ración [37, 39, 47], así como del cereal utilizado y del tamaño de la fibra [15, 51]. La masticación del grano toscamente molido genera saliva, aunque siempre en menor cantidad que la secretada por efecto del consumo de forraje. Al aumentar el contenido de fibra del alimento crece el tiempo empleado en la masticación y la rumia y, en consecuencia, mayor será la secreción de saliva.

De acuerdo con Bach [3], existe una relación clara entre el tamaño de partícula de la fibra y la acidosis ruminal. En el presente caso, la fibra añadida al concentrado en el sistema R. M. es paja triturada de avena, trigo y cebada, de pequeño tamaño (3-6 cm aproximadamente), que nada tiene que ver con la administrada en el caso de los animales alimentados con C. P., donde el forraje, procedente de los mismos cereales, se presenta en forma empaquetada sin un proceso previo de triturado. Por tanto, el menor tamaño de las partículas del forraje en el R. M. podría influir en el control del pH, al no estimular suficientemente la masticación y la rumia [4, 10, 48, 50] y con ellas la salivación [26].

El pH ruminal puede variar en función del tiempo transcurrido después de la última comida. El pH suele ser mínimo entre los 30 minutos (min) y las 4 h después de la ingestión [39] y se eleva entre 1 y 1,5 puntos en períodos de ayuno total de 12 h, para terneros de cebo [11]. En el presente caso, la última ingestión de alimento antes del sacrificio y toma de muestras aconteció en las primeras h de la mañana, por tanto, en condiciones de ayuno de al menos 10 h cabría esperar un valor de pH medio más alcalino de lo encontrado.

En el grupo de animales control la longitud media de las papilas del rumen fue de 5823,03 ± 746,57 μm y el grosor de 221,48 μm ± 33,094 μm. Los valores de ambos parámetros, obtenidos en los animales en función del sistema de alimentación utilizado, se muestran en la TABLA I.

TABLA I
VALORES MEDIOS OBTENIDOS PARA LA LONGITUD Y GROSOR DE LA PAPILA RUMINAL, EN FUNCIÓN DEL SISTEMA DE FINALIZACIÓN UTILIZADO

(**=P<0,001)

Se observó una reducción de la longitud de papila, de aproximadamente 42,53 %, y un aumento del valor medio del grosor de la mucosa papilar que ascendió, aproximadamente, al doble del valor obtenido en el grupo de animales considerado control (FIG. 1a y 1b).

FIGURAS:
1A: PAPILAS NORMALES GRUPO CONTROL. 1B ENGROSAMIENTO Y ACORTAMIENTO PAPILAR. H-E X400.

Los resultados de ambos parámetros, registrados en función de la duración de la alimentación de finalización o acabado, se muestran en la TABLA II, encontrándose diferencias significativas entre los dos grupos considerados, tanto para la longitud de la papila como para el grosor de la misma.

TABLA II
VALORES MEDIOS OBTENIDOS PARA LA LONGITUD Y GROSOR DE LA PAPILA RUMINAL, EN FUNCIÓN DE LA DURACIÓN DE LA ALIMENTACIÓN DE FINALIZACIÓN

(Letras diferentes en la misma columna indican diferencias significativas, **= P<0,01 ***=P<0,001)

Aunque no existen diferencias significativas entre los valores de engrosamiento papilar de los animales pertenecientes a los dos tipos de manejo alimentario considerados, sí se aprecia un engrosamiento de las papilas ligeramente superior en los alimentados únicamente con el sistema R. M. El resultado no es clásico y se contradice con lo señalado por Steele y col. [44] quienes observaron unos estratos córneo y granuloso intactos, con dietas altas en fibra y un aumento evidente de grosor cuando los animales son sometidos a una dieta rica en carbohidratos.

En el presente caso, el grado de engrosamiento registrado invita a pensar en la instalación de una patología crónica que se atenuaría a medida que aumentan la duración del cebamiento. El hecho de que el grado de engrosamiento de la mucosa fuera significativamente menor (369,38 ± 99,73 μm) en los animales alimentados con C. P. durante un periodo de tiempo largo, más de seis mes, en comparación con el resto (451,93 ±157,93 μm), hace pensar que el sistema C. P. sería mejor soportado por los animales que el sistema R. M., produciendo un efecto menos nocivo sobre la pared ruminal. Posiblemente la ingesta de forraje de mayores dimensiones de partícula en el caso del sistema C. P. (no triturado como en el caso del R. M.) estimule la rumia y la salivación de una forma más evidente y su efecto tamponante proporcione un mejor resultado sobre los valores de pH y, a su vez, un menor engrosamiento de las papilas.

Algunos estudios [6, 32, 35] han mostrado que, el nivel de inclusión de forraje en la ración y el tamaño de la partícula de dichos alimentos tienen un efecto directo sobre la longitud de las papilas ruminales, que disminuye su longitud en dietas con mayor proporción de forraje, como ocurre en el presente caso. No obstante, el acortamiento papilar registrado en ambos grupos de animales, da una idea de la intensidad de cebamiento llevada a cabo y del efecto negativo que ambas prácticas de manejo tienen sobre la estructura histológica de la mucosa.

Resulta destacable el mayor acortamiento de papila que presentan los grupos de animales sobrealimentados durante más de 6 mes en comparación con el resto. Se refuerza así la teoría de que una alimentación extremadamente rica en concentrados provoca una alteración de la fisiología ruminal que se manifiesta por una degradación de la pared ruminal, con acortamiento de las papilas y engrosamiento de la mucosa y por tanto una menor capacidad de absorción de nutrientes.

Al comparar los resultados de los dos grupos de alimentación intensiva considerados, aparecen diferencias, significativas (P < 0,001) para el grado y extensión de la afección de la mucosa. En las FIGS. 2 y 3 se aprecia cómo la lámina propia es la parte que más porcentaje del engrosamiento padece en el grupo de animales cebados durante menos de seis mes. En los animales alimentados de forma intensiva durante un periodo de tiempo más prolongado se registran cambios significativos en ambas estructuras.

FIGURA 2
PARTES AFECTADAS DE LA MUCOSA EN FUNCIÓN DEL SISTEMA DE CEBO EMPLEADO Y LOS MESES DE DURACIÓN DEL MISMO.

FIGURA 3
GRADO DE ENGROSAMIENTO, EN FUNCIÓN DEL SISTEMA DE CEBO EMPLEADO Y LOS MESES DE DURACIÓN DEL MISMO.

En los animales cebados de forma intensiva durante periodos de tiempo inferiores a los seis mes aparece un engrosamiento de la mucosa en la que la lámina propia, por proliferación del tejido conjuntivo, es la que más contribuye al engrosamiento mencionado. Esto puede ser debido a una mayor adaptación de la estructura papilar al tipo de alimentación (se debe recordar que son los animales que menor acortamiento de longitud de papila presentan). En cambio, en los toros alimentados de forma intensiva pero durante un periodo de tiempo mayor, los cambios se sustancian fundamentalmente en el epitelio (con un aumento de número de capas o del tamaño de sus células). Posiblemente, en este caso, sea la consecuencia de una menor adaptación del sistema digestivo a la causa agresiva, acompañada de un mayor acortamiento de la longitud papilar. El engrosamiento experimentado por la lámina propia en los grupos de animales alimentados en cebamiento durante menos de 6 mes podría contribuir a la persistencia de una longitud mayor de la propia papila [16, 45]. Este hecho se explicaría teniendo en cuenta que, los toros de estos grupos se someten a un cebamiento mucho más intensivo y forzado que los de los grupos cebados durante más de 6 meses y la reacción de la lámina propia de la mucosa sería mayor. Al aumentar el tiempo de cebamiento, la respuesta de adaptación se distribuye más uniformemente entre ambas partes de la mucosa, epitelio y lámina propia.

En el presente caso, tratándose de animales que padecen acidosis ruminal crónica, el epitelio sufre un marcado engrosamiento y se vuelve frágil, perdiendo su capacidad de actuar como barrera entre el medio interno ruminal y la sangre. Esta desvitalización epitelial comporta pérdidas de sustancia [36] que predisponen a la aparición de soluciones de continuidad en dicho epitelio, normalmente en zonas de mayor fricción, que permiten el paso de microorganismos hacia el torrente circulatorio y el consiguiente riesgo de padecer septicemias por parte del animal [39].

Las pérdidas de continuidad del epitelio son mayoritariamente puntuales, existiendo una desaparición de los primeros estratos epiteliales, aunque a veces también se ve afectado el estrato granuloso y, ocasionalmente, la alteración llega hasta el estrato basal (FIG. 4).

FIGURA 4
ALTERACIÓN EPITELIAL Y ENGROSAMIENTO DE LOS ESTRATOS BASALES DE LA ZONA AFECTADA. H-E X400.

En los animales alimentados en cebamiento intensivo mediante el sistema C. P. durante un periodo de tiempo superior a los 6 meses se observa una mayor afección puntual y focal de las estructuras papilares alteradas, siendo en el caso de un cebamiento de menor duración mediante el mismo sistema (C. P.) las afecciones puntuales mayoritarias (FIG. 3). Por otro lado, en el caso del sistema R. M. existe un número elevado de animales con alteraciones focales y multifocales.

Se aprecia, también, un epitelio estratificado plano queratinizado, formado superficialmente por estratos de queratina y seguidos, en profundidad, por estratos córneos y granulosos, con cierto aplanamiento y fenómenos de degeneración celular. Las células córneas son aplanadas y desprovistas de núcleo. Por debajo se dispone el estrato lúcido, más o menos continuo, formado por células hinchadas y no coloreadas.

Las pérdidas epiteliales más marcadas no siempre van unidas a un acortamiento o a un mayor engrosamiento de papila. No es posible presuponer que en todos los casos en los que la papila se acorta de forma patente (> 50%) o existe un engrosamiento palpable (> 300 μm) va a haber grandes cambios epiteliales puesto que en ocasiones se ha observado lo contrario.

Fundamentalmente estas alteraciones se aprecian en la zona apical de la papila, que sufre un proceso de descamación más intenso. Normalmente la pérdida de sustancia implica la afectación de las primeras capas, sobre todo las córneas. En las zonas de pérdida de sustancia se aprecia un engrosamiento de las capas epiteliales restantes como respuesta orgánica a la descamación.

A pesar de que las pérdidas de continuidad del epitelio, en este estudio, son puntuales en los animales alimentados mediante el sistema C. P., en los individuos alimentados intensivamente durante un periodo de tiempo superior a 6 mes se observa una mayor afección focal de las estructuras papilares alteradas (FIG. 3); se aprecia, por tanto, un mayor efecto nocivo sobre la mucosa que influye, como se ha visto mayoritariamente sobre el epitelio. Por otro lado, se puede apreciar un efecto negativo del sistema de alimentación R. M. que se hace evidente por la existencia de un número mayor de animales con alteraciones focales y multifocales.

Steele y col. [44] observaron en bovinos alimentados con altas cantidades de carbohidratos, una difusa diferenciación entre los diversos estratos internos de la mucosa papilar, ya que las células del estrato basal migraron hacia el lumen a mayor velocidad sin diferenciarse convenientemente, siendo similar a lo que se ha encontrado en el estudio histopatológico. Además, dichos autores encuentran también, grietas profundas en la mucosa y describen pérdidas de continuidad semejantes a las que se han descrito en el presente trabajo, donde la adherencia entre las células del estrato corneo y el estrato granuloso parece estar comprometida, evidenciado por grandes espacios entre células, con una infiltración de los estratos superiores del epitelio ruminal con células semejantes a linfocitos.

En los animales cebados con el sistema C.P. durante menos de 6 mes se intuye que existe una mayor adaptación de la estructura ruminal teniendo en cuenta la afectación y el engrosamiento de las diferentes partes de la mucosa, puestos de manifiesto en los análisis histológicos efectuados.

La presencia de estas células (FIG. 5) indica daños en la mucosa ruminal. Se han encontrado diferencias, significativas (P < 0,05), con mayores niveles de afectación en los animales que utilizan el sistema de alimentación R.M. (FIG. 6).

FIGURA 5
PRESENCIA DE CÉLULAS CÓRNEAS ANÓMALAS (*) JUNTO A OTRAS DE ASPECTO ESPUMOSO (FLECHA). H-E X200.

FIGURA 6
PRESENCIA DE CÉLULAS ESPUMOSAS EN FUNCIÓN DEL SISTEMA Y DE LA DURACIÓN DEL CEBO EMPLEADO PRE-LIDIA.

La existencia de células de apariencia espumosa es indicativa de fenómenos patentes de degeneración celular. Se observó una presencia significativamente mayor de células espumosas en la mucosa de los animales alimentados con R. M. (FIG. 6). En sintonía con todo lo anteriormente señalado para este grupo de animales parece existir una mayor lesión ruminal influenciada por el modelo de presentación del alimento.

La aparición de células oscuras en la mucosa (muy basófilas) indica una queratinización precoz de las mismas, son muy visibles y se localizan generalmente en las zonas más dañadas de la pared del rumen. A pesar de observar un importante número de estas células en las mucosas de los animales alimentados con C. P., la cantidad es significativamente mayor en el grupo alimentado con R. M., lo que indica una adaptación aguda o un proceso de reacción de mayor entidad, lo que induce a pensar en la existencia de un efecto negativo de la reducción del tamaño de partícula del forraje sobre la estructura de la mucosa de los animales alimentados con este sistema.

Además, en la alimentación de los toros de lidia existen otros problemas añadidos y relacionados con el manejo. Por un lado, una alimentación irregular a lo largo de la vida del animal, con periodos de carencias profundas y un cebamiento excesivo final [12, 42] y, por otro, la administración del alimento en una o dos tomas diarias, ritmo de ingestión considerado inapropiado por autores [15, 21], los cuales estiman que a mayor número de tomas (6 como media, e incluso ad libitum) se obtiene una mayor estabilidad del pH ruminal y de la producción de AGVs.